菠菜色素的提取和分离..docVIP

菠菜色素的提取和分离 【摘要】：本实验用浸泡和抽滤法对菠菜色素进行了提取，介绍了薄层层析和柱层析的原理及通过薄层层析鉴定不同色素和通过柱层析进行叶绿素、胡萝卜素、叶黄素的分离。 【关键词】：菠菜色素；薄层层析；柱层析；石油醚；乙醇 前言：菠菜叶中含有叶绿素、胡萝卜素和叶黄素等多种天然色素。叶绿素是植物进行光合作用所必需的催化剂，也是食用的绿色色素，可用于糕点、饮料水等，添加于胶姆糖中海可消除口臭。胡萝卜素的三种异构体中β-异构体具有维生素A的生理活性，可代替维生素A使用，也可作为食品工业中的色素使用，最新研究报道，β-胡萝卜素还有防癌功能。也黄素是胡萝卜素的羟基衍生物，在光合作用中能起收集光能的作用。由此可见，叶绿素等天然色素有着十分重要的作用，而绿色植物中色素的分离和提取也显得非常重要。 一、实验目的 1、通过绿色植物色素的提取和分离，了解天然物质分离提纯方法； 2、了解柱层析和薄层色谱分离的基本原理，掌握柱层析和薄层色谱分离的操作技术； 3、学习柱色谱和薄层色谱分离操作，掌握菠菜色素的提取和分离操作技术及化合物Rf值的测定方法，加深了解微量有机物色谱分离鉴定的原理。 二、实验原理 1、绿色植物如菠菜叶中含有叶绿素(绿)、胡萝卜素(橙)和叶黄素(黄)等多种天然色素。 叶绿素存在两种结构相似的形式即叶绿素a(C55H72O5N4Mg)和叶绿素b(C55H70O6N4Mg)，其差别仅是叶绿素a中一个甲基被甲酰基所取代从而形成了叶绿素b。叶绿素分子中含有一些极性基团，但大的烃基结构使它易溶于醚、石油醚等一些非极性的溶剂。 胡萝卜素（C40H56）是具有长链结构的共轭多烯。它有三种异构体，即a-胡萝卜素、β-胡萝卜素和γ-胡萝卜素，其中β-胡萝卜素含量最多，也最重要。 叶黄素（C40H56O2）是胡萝卜素的羟基衍生物，它在绿叶中的含量通常是胡萝卜素的两倍。与胡萝卜素相比，叶黄素较易溶于醇而在石油醚中溶解度较小。 在薄层层析时，上述化合物的展开速度不同；在柱层析时，流出速度有差异，可被极性不同的溶剂洗脱。 2、薄层层析 薄层层析又叫薄层色谱，常用TLC表示，是一种微量、快速和简便的色谱方法，可用于分离混合物和精制化合物。薄层色谱是在干净的玻璃板上均匀地涂一层吸附剂或支持剂，待干燥、活化后将样品溶液用管口平整的毛细管加于离薄层板一端约1cm处的起点线上，晾干或吹干后置薄层板于盛有展开剂的展开槽内，浸入深度为0.5cm。待展开剂前沿离顶端约1cm附近时，将色谱板取出，干燥后喷以显色剂或在紫外灯下显色。记录原点至主斑点中心及展开剂前沿的距离，计算Rf值： 3、柱层析 柱色谱法又称柱上层析法，简称柱层析，它是提纯少量物质的有效方法，常见的有吸附色谱和分配色谱。在吸附色谱中，常用氧化铝或者硅胶做吸附剂，填装在柱中的吸附剂将混合物中各组分先从溶液中吸附到其表面上，而后用溶剂洗脱。溶剂流经吸附剂时发生无数次吸附和脱附的过程，由于各组分被吸附的程度不同，吸附强的组分移动得慢留在柱的上端，吸附弱的组分移动得快则在柱的下端，从而达到分离的目的。 三、仪器与试剂 1、仪器：层析板、层析柱、烧杯、锥形瓶、布氏漏斗、抽滤瓶、玻棒、表面皿、分液漏斗、研钵、洗耳球、滴管 2、试剂：新鲜菠菜叶、无水硫酸钠、石油醚：乙醇（5:1，3:1，3:2）、石油醚-乙酸乙酯展开剂（3:2）、硅胶 四、实验操作步骤 1. 抽滤法提取菠菜色素 取 20 g 洗净且用滤纸吸干的新鲜菠菜叶, 用剪刀剪碎并与 10ml 3∶2( 体积比) 石油醚-乙醇混合液拌匀, 在研钵中研磨约 5 min, 再加入10ml3∶2( 体积比) 石油醚-乙醇混合液浸泡20-30 min,然后用布氏漏斗轻微抽滤,得到菠菜色素粗品浓缩液,用20ml水将浓缩液洗至分液漏斗中，对浓缩液进行分液萃取，取上层液，加入2 g无水硫酸钠干燥。 2、薄层层析 取一块活化后的层析板，在离一端约1cm处画上一条起点线，并小心点样，然后放入预先加好体积比为3:2的石油醚-乙酸乙酯展开剂的大烧杯中。待展开剂上升到规定高度时，取出层析板在空气中晾干，用铅笔做出标记，测量并记录长度。 3、柱层析 称取9g硅胶倒于烧杯中，加入30-40ml石油醚，搅拌均匀并倒入cm的层析柱中，约15cm高。加入时小心打开柱下的旋塞，保持石油醚能够流下，而硅胶在柱中堆积，必要时可用洗耳球轻轻在层析柱的周围敲击，使吸附剂装得平整致密。装完后，上面再加一片圆形滤纸，打开下端旋塞，放出溶剂至硅胶表面剩1-2mm高为止（▲注意任何时候，硅胶表面都不得露出液面）。 将刚才提取的菠菜色素浓缩液用滴管小心地加入到层析柱顶部，加完后，打开下端旋塞，让液面下降到柱面一下1mm左右，关闭旋塞，继续滴加数滴石油醚，打开旋塞，使液面下降。反复几次，使色素全