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标准曲线：又称校正曲线或工作曲线，是比色分析法中不可缺少的步骤，从浓度-光密度值直线的直线特性，可判断所采用方法的成色反应是否符合Lambert-Beer定律 Lambert-Beer定律： Lambert-Beer 定律是说明物质对单色光吸收的强弱与吸光物质的浓度（C）和 液层厚度（l）间的关系的定律，是光吸收的基本定律，是紫外-可见光度法定量的基础。 双缩脲法： ·原理：蛋白质分子中含有许多肽键在碱性溶液中能与Cu2+反应生成紫红色化合物，在1-10mg/ml的范围内，其颜色深浅与蛋白质浓度成正比。 ·优点：操作简便、迅速，受蛋白质种类性质的影响较小 ·缺点;灵敏度差，特异性不高，除与-CONH-由此反应外，还与-CONH2、-CH2NH2、-CS-NH2等基团有此反应。 ·试剂：蛋白质标准液、待测血清样本、生理盐水、双缩脲试剂 紫外分光光度法： ·原理：蛋白质分子中含共轭双键的酪氨酸和色氨酸等芳香族氨基酸，其吸收高峰在280nm处，但核酸在280nm处也有一定吸收能力，其吸收峰最大值在260nm处，经经验公式校正，可推算出蛋白质的真实含量。 ·优点：操作简便、迅速，蛋白质不损失，可回收 ·缺点;结果不准确，仅可作为粗略的测定方式 ·试剂：血清样本、生理盐水 BCA法： ·原理：碱性条件下，BCA与蛋白质结合时，蛋白质将Cu2+还原为Cu+，一个Cu+螯合两个BCA分子，试剂从原来的苹果绿变成紫色复合物，在一定范围内，颜色深浅与蛋白质成正比。 ·优点：操作简便、快速，灵敏度高，准确，试剂稳定，经济实用，抗干扰能力强。 ·缺点：反应时间长且蛋白质也会发生不可逆的变性。 ·原理：经SDS,将待测样品转移到固相支持体上（常为NC膜），膜可与抗靶蛋白的非标记抗体（一抗）反应，后可与有标记的二抗结合进行检测，本实验直接使用辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG抗体直接检测人血清IgG，无需使用抗体，漂洗后可加入生色底物进行特异性显带。 ·操作：SDS→组装：正极-海绵-3层滤纸-NC膜-凝胶-3层滤纸-海绵-负极（胶负膜正）→拆下装置，用考马斯亮蓝染液染色，检查蛋白质转移是否完全；用丽春红S对NC膜染色至蛋白带出现→NC膜放入塑料袋，加入封闭液，摇床温浴→将封闭过的NC膜放入另一袋中，加抗体稀释液，摇床→将NC膜转移至盛有漂洗液的托盘上，摇动漂洗三次→加入生色底物，一旦蛋白带的颜色达到要求，立即取出NC膜 葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的原理及操作注意事项 原理：氧化利用空气和水催化葡萄分子中的醛基氧化，生成酸并释放过氧化氢。过氧化氢在氧受体，将分解为水和氧。后者还原性氧受体-氨基安替和酚氧化，缩合生成红色醌类化合物。醌的生成量葡萄糖成正比。。将测定与经过同样处理的葡萄糖标准液进行，即可计算出血的含量。 由于温度对本实验影响较大，水浴时严格控制温度，防止酶活性丧失。 DNA的方法 原理：十二烷基磺酸钠(SDS) 可使细胞膜裂解。经SDS处理后，细菌染色体DNA会缠绕附着在细胞碎片上，同时由于细菌染色体DNA比质粒大得多，易受机械力和核酸酶等的作用而被切断成不同大小的线性片段。当用强热或酸、碱处理时，细菌的线性染色体DNA和蛋白质变性，而共价闭合环状DNAcccDNA)的两条链不会相互分开。当外界条件恢复正常时，线状染色体DNA片段难以复性，而是与变性的蛋白质和细胞碎片缠绕在一起，而质粒DNA双链又恢复原状，重新形成天然的超螺旋分子，并以溶解状态存在于液相中。 I：重悬细菌 葡萄糖：比重大，细菌不易沉淀 TrisHCL：体系 螯合金属离子 溶液II：破膜，变性基因组DNA和蛋白质 破膜作用，解聚核蛋白并与蛋白质分子结合使之变性 NAOH：破坏氢键，变性基因组DNA 溶液III溶液，复性质DNA （2）酚:氯仿纯化DNA 原理： 氯仿：萃取溶液中的酚 乙醇：沉淀得到高质量的DNA3）DNA琼脂糖凝胶电泳 原理： 线性DNA分子在电中越大，摩擦阻力越大，迁移速度越慢。DNA在凝胶中获得有效的分离并测得其分子量大小。染料溴化乙（）插入DNA双螺旋结构两个之间，与DNA形成荧光，可确定DNA在凝胶中的位置；发射的荧光强度正比于DNA的含量，与已知浓度的标准品作电泳对照，可估算出待测样品的浓度。 感受态细菌：受体细胞经过一些特殊方法的处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许多有外源DNA的载体分子通过的感受态细胞。 质粒DNA：细菌染色体以外的遗传物质，是环状闭合的双链DNA，存在于细胞质中，具有自我复制的能力，所携带的遗传信息能赋予宿主菌某些生物学性状。 转化: 是将异源DNA分子引入一细胞株系，使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段，是基因工程等研究领域的基本实验技术。 蓝白筛选是在指示培养基上用颜色直接筛选重组克隆的方