薯蓣皂苷元的提取精制和鉴别最终版..docVIP

实验六 薯蓣皂苷元的提取精制和鉴别 多种薯蓣科植物中都含有薯蓣皂苷，一般含量在0.5%~2.5%。我国薯蓣科植物分布很广，产量十分丰富，其中可用于生产薯蓣皂苷元的植物有盾叶薯蓣（D.Zingiberensis C.H.Wright），穿龙薯蓣（D.nipponica Makino），黄山药（D.panthaica prain et Burkil）；紫黄素（D.nipponica Makinovar rosthani prain et Burk）等。 薯蓣皂苷元（Diosgenin）是产生甾体激素（如可的松）和性激素的重要原料。其分子式为C27H42O31 ，相对分子质量414.61,为白色晶体，熔点204～207℃，[α]D25 -129.3（CHCl3），溶于一般有机溶剂和乙酸，不溶于水。在植物体内薯蓣皂苷元是葡萄糖、鼠李糖结合成的薯蓣皂苷（Dioscin）而存在。 一、实验目的 掌握甾体皂苷元的提取和精制方法。 熟悉甾体皂苷及皂苷元的性质和鉴定方法。 掌握索式提取器的使用方法。 二、实验内容 (1)薯蓣皂苷元的提取 (2)薯蓣皂苷元的精制 (3)薯蓣皂苷与皂苷元的鉴定 三、实验时间 步骤 所需时间 薯蓣皂苷元的提取 20～22 薯蓣皂苷元的精制 2 薯蓣皂苷与薯蓣皂苷元的鉴定 1 四、实验原理 在植物体内薯蓣皂苷元是与葡萄糖、鼠李糖结合成薯蓣皂苷而存在。提取分离时，一般是先用稀酸将薯蓣皂苷水解成薯蓣皂苷元与单糖（葡萄糖、鼠李糖）。因薯蓣皂苷元不溶于水，混存于植物残渣中，故可用有机溶剂（如石油醚）直接从植物残渣中提取薯蓣皂苷元。 五、实验器材 1、试验设备与仪器 圆底烧瓶、冷凝管、机械搅拌器、索式提取器、水浴锅、抽滤瓶、布氏漏斗、硅胶CMC－Na板、 2、实验器材与试剂 原材料：盾叶薯蓣（粗粉）或穿龙薯蓣（粗粉或饮片），2%血细胞悬浮液。 无机试剂：硫酸、碳酸钠、二氯化锑、氯化锌、磷钼酸、活性炭。 有机试剂：石油醚（60～90℃）、乙酸乙酯、三氯甲烷、甲醇、冰醋酸、乙酰氯、乙酸酐、苯、乙醇。 3、实验前准备 薯蓣植物根茎的预发酵：称取盾叶薯蓣或穿山龙粗粉50g，置1000mL圆底烧瓶中，加入200mL水，摇匀，在35℃下发酵48h。 六、实验步骤 1、薯蓣皂苷元的提取 预发酵完毕，向发酵液中加入200ml3mol/l的盐酸溶液，安装冷凝管和机械搅拌器，在电热套上加热回流4h，稍冷后抽滤，药渣用碳酸钠水溶液（10%）洗至中性，常水洗数次，过滤。滤渣研碎，低温（不超过80℃）干燥12h。取出后再研成细粉，装入滤纸筒后置索氏提取器中，用石油醚（沸程60~90℃） 2、薯蓣皂苷元的精制 将所得粗品置于100mL圆底烧瓶中，用40~60mL乙醇于水浴上加热溶解（外观颜色深时可加1%~2%活性炭脱色），趁热抽滤，用少量乙醇洗涤滤渣。滤液放置，析出白色针状结晶。收集结晶，烘干，的薯蓣皂苷元精品，测熔点。 3、薯蓣皂苷与皂苷元的鉴定 （1）薯蓣皂苷的鉴定 泡沫试验：取穿山龙的水浸出液2ml置于小试管中，用力振摇1min，能产生多量泡沫且在10min内泡沫没有显著消失。另取试管2支，各加入穿山龙热水浸出液1ml，向其中一管内加入5ml 0.1mol/l 的氢氧化钠溶液，另一管加入2ml 0.1mol/l的盐酸溶液，将两管塞紧用力振摇1min。观察两管出现泡沫的情况。 溶血试验：取洁净试管2支，其中1支加入蒸馏水0.5ml（对照管），另一试管加入穿山龙的水浸液0.5ml，然后分别加入0.5ml 0.8% 氯化钠水溶液，摇匀，再加入1ml 2% 红血球悬浮液，充分摇匀，观察溶血现象。如果试管中溶液为透明的鲜红色，管底无红色沉淀物，则全部溶血；如果试管中溶液为透明但无色，管底沉着大量红血球，振摇立即发生浑浊，说明不溶血。 （2）皂苷元的鉴定 磷钼酸试验：将薯蓣皂苷元重结晶的母液点于滤纸片活硅胶薄板上，点加磷钼酸试剂，略加热，观察颜色变化，并与空白对照。 三氯乙酸试验：去少量薯蓣皂苷元结晶置于干燥试管中，加等量固体三氯乙酸，放在60~70℃恒温水浴中加热，几分钟后发生颜色变化为由红→紫色。继续加热试管至100℃，观察变化情况。 乙酸酐-浓硫酸试验：去少量薯蓣皂苷元结晶，置于白色点滴板上，加乙酸酐-浓硫酸试剂2~3滴，观察颜色由红→紫→蓝，放置后变污绿色。 三氯甲烷-浓硫酸是经验：去少量薯蓣皂苷元结晶，置于试管中，加入1mL三氯甲烷使其溶解