标准征求意见稿.doc-中国烟草标准化.docVIP

前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009和GB/T 20001.4-2001给出的规则起草。 本标准由国家烟草专卖局提出。 本标准由全国烟草标准化技术委员会卷烟分技术委员会(SAC/TC/144/SC1)归口。 本标准起草单位: 云南烟草科学研究院。 本标准主要起草人：杨光宇、段沅杏、刘巍、刘志华、王岚、韩敬美、张霞、刘春波、张承明、陈永宽、缪明明。 烟草及烟草制品 游离态甾醇的测定 高效液相色谱-串联质谱法 1 范围 本标准规定了烟草及烟草制品中甾醇-谷甾醇)的液相色谱-串联质谱测定方法。 本标准适用于烟草及烟草制品中甾醇-谷甾醇)的测定。 本方法测定烟草及烟草制品中-谷甾醇的检出限分别为0.29 mg/kg，0.08 mg/kg，0.14 mg/kg，0.58 mg/kg，0.66 mg/kg；定量限分别为0.97 mg/kg，0.28 mg/kg，0.47 mg/kg，1.95 mg/kg，2.21 mg/kg。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 YC/T 31 烟草及烟草制品 试样的制备和水分测定 烘箱法 3 原理 采用萃取样品-谷甾醇，6-酮胆甾烷醇为内标对烟草及烟草制品中游离态麦角甾醇、胆甾醇、菜油甾醇、豆甾醇、β-谷甾醇进行定量分析。 4 试剂和材料 4.1水，符合GB/T 6682 中一级水的要求。 4.2 甲醇，色谱纯。 4.3 麦角甾醇（C28H44O, CAS : 57-87-4），纯度≥99%。 4.4 胆甾醇（C27H46O, CAS : 57-88-5），纯度≥95%。 4.5 菜油甾醇（C28H48O, CAS : 474-62-4），纯度≥95%。 4.6 豆甾醇（C29H48O, CAS : 83-48-7），纯度≥95%。 4.7 β-谷甾醇（C29H50O, CAS : 83-46-5），纯度≥98%。 4.8 6-酮胆甾烷醇（C27H46O2, CAS :1175-06-0），纯度≥98%。 4.9 内标溶液 4.9.1 内标储备液 准确称取50 mg 6-酮胆甾烷醇100 mL棕色容量瓶中，甲醇至刻度内标储备液内标储备液在2 ℃～8 ℃下保存。移取1mL 6-酮胆甾烷醇内标储备液至25 mL容量瓶中，用甲醇至刻度，配制成浓度为20.0 μg/mL 的内标溶液。移取8mL内标溶液于1000 mL的容量瓶中，用甲醇至刻度。 分别称取5 mg麦角甾醇、胆甾醇、豆甾醇、β谷甾醇100 mL棕色容量瓶中，甲醇至刻度，有效期为分别准确移取麦角甾醇、胆甾醇、豆甾醇、β谷甾醇标准储备液0.5 mL、1.0 mL、1.0 mL1.0 mL、1.0 mL至25 mL容量瓶中，用甲醇至刻度麦角甾醇胆甾醇、豆甾醇和β谷甾醇移取L、L 、L、L、L、L一级混合标准溶液（）至mL棕色容量瓶中，再准确加入L内标液（），至刻度得到系列标准工作溶液0.0001 g。 5.2振荡器，最大转速应不小于150 r/min。 5.3 高效液相色谱-串联质谱联用仪，配备大气压化学电离源（APCI）。 5.4 具塞锥形瓶，100 mL。 5.5 有机相滤膜，0.22 μm。 6 分析步骤 6.1 试样制备 按YC/T 31进行制备称取0.2 g精确至0.g）于100 mL具塞锥形瓶中，准确加入40.0 mL萃取溶液，振荡萃取。取萃取液过0.22 μm滤膜，。液相色谱条件 ——色谱柱：C181.7 μm，2.1 mm，长度100 mm）或等效柱； ——流速：0.mL/min； ——柱温：0 ℃； ——进样量：5 μL ——流动相A：B：——梯度洗脱见表表液相色谱 时间/min 流动相A /% 流动相B /% 0 95 5 6.0 100 0 7.5 100 0 8.0 95 5 12.0 95 5 6.3.2 质谱条件 ——：；——扫描：正离子；——检测方式：多反应监测（MRM）； ——电喷雾电压：5500 V； ——离子源温度：500 ℃； ——离子对的驻留监测时间 (dwell time)——辅助气Gas1压力：0.349 MPa； ——辅助气Gas2压力：0.483 MPa； 各分析物的定量离子对、定性离子对及碰撞能量（CE）见表2。 表质谱参数 分析物 定量离子对(m/z) CE(V) 定性离子对(m/z) CE(V) 麦角甾醇 379.5/69.3 39 379.5/159.2 39 胆甾醇 369.3/147.2 33 369.3/161.3 32 383.3/147.3 37 383.3/161.0 37 豆甾醇 395.5/83.1 36 395.5/147.3 37 β－谷甾醇 397.5/161.3 29 397.5/147.