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Agilent 1200 HPLC仪器组成及基本操作步骤 Agilent 1200 HPLC 结构图 高效液相色谱法（HPLC）：是在经典液相色谱法的基础上，以高压输送流动相，采用高效固定相及高灵敏度检测器，发展而成的现代液相色谱分析方法。它具有分离效率高、选择性好、分析速度快、检测灵敏度高、操作自动化和应用范围广的特点。 一.溶剂瓶装置 溶剂 使用棕色玻璃瓶会避免藻类的生长；所用的水为重蒸水；溶剂选用色谱纯，使用前要用0.22 μm的过滤膜过滤；使用新鲜配制的流动相，特别是水溶剂或盐缓冲液，建议不超过两天；避免溶剂瓶暴露在直射阳光下。 避免使用下述可腐蚀钢铁的溶剂： 碱金属卤化物及其酸溶液(如：碘化锂、氯化钾等)；高浓度无机酸，如硝酸、硫酸；可能含有过氧化物的色谱醇醚(如THF、二氧六环、二丙基乙醚)。这些在 使用前必须用干燥氧化铝过滤除去过氧化物；含强络合剂的溶液(如EDTA，乙二胺四乙酸)；四氯化碳与2-异丙醇或四氢呋喃的混合液。 二.在线脱气装置 在线脱气机工作原理 四元泵真空脱气机由一个四通道（有四个管状塑料膜）真空箱和一个真空泵构成。打开真空脱气机的电源开关后，控制电路即开启真空泵，真空泵运行使真空箱内产生部分真空。真空度由压力传感测定，根据传感器信号，真空脱气机通过运行或关闭真空泵来维持真空度。 溶剂瓶中的溶剂在LC泵的抽动下流过真空箱内的特殊管状塑料膜。当溶剂经过真空管时，溶剂中溶解的气体将渗透过塑料膜进入真空箱，到达真空脱气机出口时，溶剂几乎被完全脱气而不含有任何气体。 三.Agilent 1200 四元泵 当盐溶液和有机溶剂混合时，盐溶液可能与有机溶剂完全混溶，而不会出现沉淀。但是在梯度阀的混合点，重力作用使盐颗粒沉淀下来。通常，阀的A通道用于水相/盐溶液，而泵的B通道用于有机溶剂。如果使用的是这样的配置，盐将落回到盐溶液中，并被溶解。 A:水相 B:甲醇 C:乙腈 D:缓冲盐 ●当泵头安装有冲洗附件时，由于该附件中也有密封垫，这样就会增加活塞杆运动时的阻力。所以开泵前一定要打开seal-wash,用10％异丙醇冲洗泵。 ●10％异丙醇有助于降低水的表面张力，并有抑菌作用。不要用其它溶剂代替。 四.手动进样器 先使阀处于装样（load）位置，用微量注射器将试样注入贮样管（sampling loop）。进样时，转动阀芯至进样（injection）位置，贮样管内的试样由流动相带入色谱柱。定量环为 20 μl。 五.检测器 按其适用范围检测器可分为通用型和专属型两大类。 ●专属型检测器只能检测某些组分的某一性质，如紫外检测器和荧光检测器，它们只对有紫外吸收或荧光发射的组分有响应。 ●通用型检测器检测的是一般物质均具有的性质，如示差折光和蒸发光散射检测器。 紫外检测器的工作原理是朗伯-比尔定律。紫外检测器包括固定波长、可变波长和光电二极管阵列检测器。 可变波长紫外检测器一般采用氘灯为光源，能够按需要选择组分的最大吸收波长为检测波长，从而提高灵敏度。 基本操作步骤 ⑴实验前准备 ①明确实验目的和检测样品的性质，选择相应的分析 色谱柱； ②配制分析的样品和流动相，选用色谱纯流动相或用0.22 μm的过滤膜过滤（进口甲醇和乙腈不用过滤） ； ③检验仪器和计算机的电源线，数据线是否连接完好。 ⑵开机 ①将所用的通路小心放入试剂瓶中（防止滤头破裂），色谱柱按流速的方向装好，要拧紧并在柱头和柱尾的下面垫上滤纸； ②先打开总电源的开关，然后打开计算机的电源，待计算机运行稳定； ③从上到下依次打开脱气机、泵、柱温箱、检测器的电源开关； ④待仪器自检完成后，双击桌面上的“联机”图标，打开工作站（如图一所示） ⑶设定参数 ①更改样品信息：单击运行控制下的样品信息弹出对话框（如图二所示），更改操作者姓名、子目录和所存储的文件的文件名。 ②设置试剂瓶的填充量：单击界面上的试剂瓶的图标，设定溶剂的体积（如图三所示） ③启动各个模块：点击启动泵、柱温箱的快捷键，启动泵和柱温箱，等柱压稳定后才能启动检测器。 ④设置柱温箱： 在图标上点击鼠标右键，单击设置柱温箱出现对话框（如图四所示）然后设置实验所需要的柱温。 ⑤脱气：单击泵的图标，点击设置泵，弹出对话框（如图五所示） 先将阀旋开1~2圈，设置流速为5ml/min,含量为100%依次purge各个管路，一般先purge水相再purge有机相。每个管路purge 3~5分钟，purge时一定要认真检查滤头和管路中是否残留有气泡。Purge完后，将流速设为1ml/min，并迅速将阀拧紧，用100%甲醇或乙腈冲洗柱子，待柱压稳定后可以打开检测器。 ⑥单击检测器的图标，然后单击设置VWD信号可出现对话框（如图六所示），可以设置所用的波长。 注