高效液相色谱法测定食醋和酱油中苯甲酸钠和山梨酸钾含量..docxVIP

高效液相色谱法测定食醋和酱油中苯甲酸钠和山梨酸钾含量食检12-1张婞指导老师：白琦【摘要】高效液相色谱法测定食醋和酱油中苯甲酸钠和山梨酸钾含量。采用RP-HPLC法，?C18?不锈钢柱为色谱柱，流动相：甲醇?：0.02mol/l?乙醇胺（5?:95）；柱温30℃，流速1mol/min?，紫外检测器（检测波长230nm），进样量2.5?，5?，7.5?，10?，15?ul?，20?u?l（样品进样量:5?ul)。【关键词】： 高效液相色谱法?外标法?苯甲酸钠?山梨酸钾?【前言】： 苯甲酸钠，化学式：C6H5O2Na，是苯甲酸的钠盐，苯甲酸钠是很常用的防腐剂，有防止变质，延长保质期的效果。山梨酸钾别名2,4-己二烯酸钾，是山梨酸的钾盐，也是防腐剂。本实验采用RP-HPLC法对酱油和醋中的苯甲酸钠和山梨酸钾的含量测定，方法简便?快 【材料与方法】1．1 材料1.1.1 仪器：高效液相色谱仪（带紫外检测器）【高压输液泵LC-6A，检测器SPD-10A，保温箱CPD-10AS，进样阀7725I】；电子天平；纯水仪；超声波清洗机。?1.1.2 试剂：①色谱甲醇经滤膜0.45um过滤；②（1+1）氨水：氨水与水等体积混合；③乙酸铵溶液0.02mol/l：称取1.54g乙酸铵，加水溶解并定容至1000ml，经滤膜0.45um过滤；④碳酸氢钠溶液20g/l：称取2g碳酸氢钠，加水至100ml,振荡溶解；⑤苯甲酸钠标准储备液1mg/ml：准确称取0.10000g苯甲酸钠，加20g/l的碳酸氢钠5ml,加热溶解，移入100ml容量瓶中，加水定容至刻度线，作为储备溶液；⑥山梨酸钾标准储备液1mg/ml：准备称取0.10000g山梨酸钾，加20g/l的碳酸氢钠5ml,加热溶解，移入100ml容量瓶中，加水定容至刻度线，作为储备溶液；⑦苯甲酸钠、山梨酸钾标准混合使用液：取苯甲酸钠、山梨酸钾标准储备液各1.0mg/ml。经滤膜0.45um过滤。1．2 高效液相色谱条件①色谱柱：C-18不锈钢柱；②流动相：甲醇:乙醇铵溶液（0.02mol/l）=5:59；③流速：1.0ml/min；④柱温：30℃；⑤检测波长（UV）：230nm；⑥进样量：5.0um；保留时间定性，峰面积用外标法定量。1．3 样品预处理量取10ml待测样品，放入小烧杯中，微温，搅拌去除二氧化碳。加（1+1）氨水调节PH值约为7，加水定容至50ml。使用前取1-2ml于小离心管内12000rpm离心，上清液经滤膜（0.45um）过滤后进样量1．4 实验过程1．4．1预热，备样：先开机泵预热20分钟，将样品加热去除其中的二氧化碳和乙醇。用（1+1）的氨水调节pH值近中性，过滤后进高效液相色谱仪，进行反相色谱分离。准备好实验需要的流动相酱油、醋、针、甲醇水，去离子水。1．4．2进样：山梨酸钾标准储备液进样量为2.5ul，酱油和食醋的进样量各为2.5ul。进样前要先洗针，用超纯水洗至少3次，再用甲醇水洗3次以上保证洗去针里面的有机物，排除气泡之后即可吸样，如果有气泡要重新吸样，注入时要快速，注样完后保持针不动，以免液体被带出。1．4．3绘制标曲：等待电脑绘制出各式样的色谱图，选择出最合适的混标图，并且绘制出苯甲酸钠和山梨酸钾的标曲，根据标曲分析样品。1．4．4分析完毕先关检测器，再用经过滤和脱气的适当溶剂清洗色谱系统，冲洗完毕后关泵，关掉电源。【结果与分析】2．1苯甲酸钠的实验数据处理及结果与分析（1）苯甲酸钠的图表与标准曲线：处理进样体积（ul）保留时间（s）峰面积处理12.54301处理25.04.507120512.703处理37.54.498179901.344处理4104.498248093.203处理5154.498365139.813依据上表所得色谱数据绘制出苯甲酸钠的标准色谱流出曲线图。以峰面积为为纵坐标，进样量为横坐标：线性回归方程：y=24746x-3907（2）山梨酸钾的图表与标准曲线：处理进样体积（ul）保留时间（s）峰面积处理12.56547处理25.06.165198080.797处理37.56.165295886处理4106.148404405.094处理5156.148594771.375依据上表所得色谱数据绘制出山梨酸钾的标准色谱流出曲线图。以峰面积为为纵坐标，进样量为横坐标：线性回归方程：y=40205x-44312.1.1混合标样的色谱图：在所有混标色谱图中 ，选择出峰最明显，成图最好的一个图谱，即15ul进样量图谱。2.1.2样品色谱图（1）食醋的色谱流出曲线：（2）酱油的色谱流出曲线：2．1．3待测样品中苯甲酸钠和山梨酸钾的含量计算：根据食醋的色谱流出曲线和山梨酸钾标准色谱流出曲线的线性回归方程y=