高效液相色谱法测定饮料中的苯甲酸..docVIP

实验题目： 教学目标： 1、了解的基本结构及操作步骤。 2、教学重点： 掌握教学难点： 了解的基本结构及操作步骤仪器药品： 教学方法： 讲授、演示教学时数： 学时 教学过程： 一、实验原理在确定的条件下，有一定的保留时间，在相同的实验条件下，分别测定纯物质和各组分的保留值，将两者进行对比，就可确定。 式（1）中：Ci为样品浓度，mg/ml; Cs为标准品浓度，mg/ml； Ai为样品峰面积； As为标准品峰面积。 二、高效液相色谱仪的组成 高效液相色谱仪由贮液罐、高压输液泵、进样装置、色谱柱、检测器、记录仪和数据处理器。 三、仪器与试剂 1、仪器 LC-2010高效液相色谱仪；色谱柱VP-ODS（4.6mm×15cm）；超声处理器；微量注射器。 2、试剂 高纯水（或二次蒸馏水）；甲醇（AR），苯甲酸（AR）；磷酸二氢钾（AR） 。 四、实验步骤 1、按操作说明书使色谱仪正常运行，并将实验条件调节如下： 柱温：40℃；流动相的组成：甲醇：水（0.05mol/L的磷酸二氢钾，PH=3.5）=75：25；流量：1.0 ml/min；紫外检测器波长：230 nm。 2、标准溶液配制与处理：准确称取0.1g干燥的苯甲酸，用无水甲醇溶解于50ml的烧杯里，再转移至100ml容量瓶中，定容，得到浓度为1mg/ml的苯甲酸甲醇溶液。再将1mg/ml的苯甲酸甲醇溶液稀释10倍，得到浓度为0.10mg/ml的苯甲酸甲醇溶液，用尼龙滤头过滤，除掉溶液中的悬浮机械杂质，同时把苯甲酸甲醇溶液注入样品瓶中，待用。 3、样品处理： 取约20ml的碳酸饮料于干净的小烧杯中，在超声处理器中超声处理5 min，同样纤维素滤头过滤，把样品注入样品瓶中，待用。 4、待基线平直后，注入苯甲酸溶液和饮料样品溶液各5.0μL，各做三次，分别记下苯甲酸的保留时间。实验完毕，用甲醇冲洗干净色谱柱。 5、再改变流动相甲醇和水的比例为65：35,50：50，待基线平直后，再分别进样苯甲酸溶液5.0μL，考察苯甲酸的分离情况。 6、实验结束时，先后用水和甲醇冲洗干净色谱柱，按要求关好仪器。 五、结果与处理 1、指出苯甲酸在样品色谱图中的位置。 根据苯甲酸样品在色谱图上的保留值，对的苯甲酸进行定性分析。 2、苯甲酸分离情况的分析。 根据苯甲酸的峰形对苯甲酸的分离情况进行分析，探讨合适的苯甲酸液相色谱分离条件。 3、根据苯甲酸样品和饮料样品中苯甲酸的峰面积，计算饮料样品中苯甲酸的含量。 六、注意事项 1、若样品和标准溶液需保存，应置于冰箱中。 2、为获得良好的结果，标准和样品的进样量要严格保持一致。 3、实验完毕后，应依次用水和甲醇冲洗干净色谱柱。 七、思考题 1、根据苯甲酸的结构式，苯甲酸能用离子色谱法分析吗？为什么？ 2、如何对苯甲酸进行定性和定量分析，方法有哪些？ 3、流动相不同比例的改变对分离结果有什么影响？原因何在？ 4、饮料为什么需要进行超声处理，原因何在？ 5、实验之前的流动相应该如何处理，为什么？ 八、教学后记  仪器分析实验 教案