第三章核酸化学forgraduatescandidates解决方案.ppt

5. RNA的提取与纯化 DEPC(焦碳酸二乙酯)：破坏RNase ①酸性胍盐+苯酚+氯仿抽提 异硫氰酸胍使蛋白质变性 ②胍盐/氯化铯将细胞抽提物密度梯度离心 上层蛋白、中间DNA、底部RNA 防止降解和变性 条件温和、防止过酸/碱、 避免剧烈搅拌 防止核酸酶作用 一单链DNA与一单链RNA分子量相同，如何区分？ 专一性的DNA酶与RNA酶 碱水解：RNA易被水解 颜色反应：兰色 …　绿色… 利用单核苷酸分析：U、T 6. 核酸及其组分含量的测定 （1）紫外吸收法（260nm） （2）定糖法 RNA：核糖→ 糠醛→ →绿色物质（670-680nm） DNA：脱氧核糖+二苯胺→兰色物质（595-620nm） 苔黑酚 地衣酚 浓HCl 浓硫酸 （4）琼脂糖凝胶电泳 溴乙锭能插入DNA分子碱基间形成复合物 紫外线照射下荧光强度与DNA含量成正比 （3）定磷法 核酸含磷量为9.5% （1g磷相当于10.5g核酸） 橘红色 核酸纯度的测定 通常用A260/A280 =1.8-2.0作为纯度标准 纯DNA比值1.8，＜ 1.8 Pr污染 纯RNA比值2.0，＞ 2.0 RNA污染 OD260的应用 DNA或RNA的定量 OD260=1.0相当于： 50μg/ml双链DNA 40μg/ml单链DNA（或RNA） 20μg/ml寡核苷酸 判断核酸样品的纯度（ OD260/OD280 ） DNA纯品: 1.8；RNA纯品: 2.0 判断DNA是否变性 变性（增色效应）；复性（减色效应） 从动植物细胞匀浆中提取基因组DNA时，常用EDTA、氯仿-异戊醇混合液和95%乙醇试剂。请根据蛋白质和核酸理化性质回答： （1）该实验中这些试剂各起什么作用？ （2）举出一种可以鉴定所提取基因组的DNA中是否残 留有RNA的方法。 EDTA：络合金属离子（核酸酶的作用…） 氯仿-异戊醇：去蛋白、去苯酚 95%乙醇：沉淀DNA 鉴定核糖、用专一性的核酸酶 在分离和鉴定动物肝DNA 和RNA 的实验中，下列 化合物的作用是什么？A . 0.1M NaCl B. 5M NaCl C. 0.1M Na2-EDTA 溶液 D .15％SDS 溶液 E .氯仿--异戊醇（24:1 溶液） 不同浓度的 NaCl溶液中DNA 和RNA 溶解度不同 在0.1MNaCl 溶液中RNA 溶解而DNA 溶解度低， 在5MNaCl中DNA 的溶解度大于RNA SDS（十二烷基硫酸钠）、EDTA为核酸酶抑制剂 EDTA：将核酸酶的激活剂Mg2+络合 SDS: 可使核蛋白体解离，使蛋白质变性 氯仿--异戊醇使蛋白质变性 可用于测量生物样品中核酸含量的元素是( )。 A．碳 B．氢 C．氧 D．磷 E．氮 核酸对紫外线的最大吸收峰在哪一波长附近？ A．280nm B．260nm C．200nm D．340nm 在核酸结构中含量较稳定的元素是 A. C B. H C. O D. N E. P 关于核酸的叙述，正确的有（??? ）。 A.是生物大分子??????????? B.是生物信息分子 C.是生物必需营养??????? D.是生物遗传的物质基础 下列含有DNA的细胞器是（ ）。 A. 线粒体 B. 内质网 C. 高尔基体 D. 核糖体 碱基与戊糖间为C-C连接的是 （ ）。 A.腺嘌呤核苷 B.胸腺嘧啶核苷 C.鸟嘌呤核苷 D.假尿核苷 当热变性的DNA复性时，温度降低要( )。 A.快速 B.缓慢 C.先慢后快 D.先快后慢 真核mRNA和原核mRNA各有何异同特点? 真核mRNA的特点是： (1)5’末端有“帽子结构”m7G(5)pppNm (2) 3‘末端有一段多聚腺苷酸(polyA)尾巴 (3)mRNA一般为单顺反子，即一条mRNA只含有一条肽链的信息，指导一条肽链的形成 (4)mRNA的代谢半衰期较长（几天） 原核mRNA的特点： (1)5’末端无帽子结构存在 (2)3’末端不含polyA结构 (3)一般为多顺反子结构，即一个mRNA中常含有几个蛋白质的信息，能指导几个蛋白质的合成 (4)mRNA代谢半衰期较短（小于10分钟） 原核生物mRNA为多顺反子，无修饰碱基 一条mRNA链上有多个编码区 真核生物mRNA为单顺反子 简述DNA和RNA分子的立体结构，它们各有哪些特点？ 稳定DNA结构的力有哪些？ D