生物制药工艺学第十四章核酸类药物要点.pptVIP

第十四章 核酸类药物 第一节 核酸类物质的分离提取及其发酵生产 一、RNA与DNA的提取与制备 （一） RNA的提取与制备 1.工业用RNA的提取 （1）RNA及其工业来源 从微生物中提取RNA是工业上最实际和有效的方法。 通常在细菌中RNA占5％-25％，在酵母中占2.7％～15％，在霉菌中占0.7%~28%, 面包酵母含RNA4.1％～7.2％。 培养酵母菌体收率高，易于提取RNA，在工业上主要由RNA生产5‘－核苷酸。 （2）高RNA含量酵母菌株的筛选 可以从自然界筛选到RNA含量高的酵母菌株，也可以用诱变育种的方法提高酵母菌的RNA含量。 （3）用工业废水培养高含量RNA酵母 减少环境污染，降低粮食消耗 （4）RNA的提取实例 啤酒酵母是提取RNA的很好的资源。 取100g压榨啤酒酵母（含水70％ ），加入230ml含NaOH 3g的水，20℃以下搅拌30min。用6mol/L HCl调至pH7，搅拌15分钟，离心得上清液255ml。冷至10℃以下，6mol/L HCl调pH2.5，置冷过夜，离心等RNA1.8g（纯度80％）。 （二） DNA的提取与制备 1.工业用DNA的提取 取新鲜冷冻鱼精20kg，用绞肉机粉碎2次成浆，加入等体积水，搅拌均匀，倾入反应锅内，缓慢搅拌，升温至100 ℃，保温15分钟，迅速冷却至20～25 ℃，离心去除鱼精蛋白等沉淀物，共获得35L含热变性DNA溶液。加乙醇沉淀，可得到固体DNA产品。 2.具有生物活性DNA的制备 动物内脏加4倍量生理盐水经组织捣碎机捣碎1分钟，匀浆于2500rpm离心30分钟，沉淀用同样体积的生理盐水洗涤3次，每次洗涤后离心，将沉淀悬浮于20倍量的冷生理盐水中，再捣碎3分钟，加入2倍量5％十二烷基磺酸钠，并搅拌2～3小时，在0 ℃2500rpm离心，在上层液中加入等体积的冷乙醇，离心即可得纤维状DNA，再用冷乙醇和丙酮洗涤，减压低温干燥得粗品DNA。 二、用酶解法、发酵法和半合成法制备核苷酸 （一）酶解法及碱水解法制备核苷酸 1.酶解法制备脱氧核苷酸 2.酶解法制备戊糖核苷酸 3.双酶法生产肌苷酸和鸟苷酸（I＋G） 呈味核苷酸 4.菌体自溶法生产核苷酸 5.碱水解法生产2‘，3’－混合核苷酸 RNA中的磷酸二酯键对碱性条件不稳定的特性，很容易生成2‘，3’－环状磷酸酯，水解生成2‘，3’－核苷酸。 取RNA配成3％～3.5％的水溶液，加氢氧化钠达0.3mol/L浓度，升温38C，保温16-20小时，用6mol/L盐酸中和至pH7.0，从RNA水解成2‘，3’－核苷酸降解率达95％以上。 （二）发酵法生产核苷酸 1.发酵法生产肌苷酸（IMP） 肌苷酸钠是一种高效增鲜剂，在谷氨酸钠中添加2％，鲜度可以增加3倍。 2.发酵法生产黄苷酸（XMP）及酶法转化成鸟苷酸 （三）半合成法制备核苷酸 三、核苷的制备 （一）RNA化学水解法制备核苷 （二）发酵法生产核苷 1.发酵法生产肌苷 2.发酵法生产鸟苷和黄苷 3.发酵法生产腺苷 第二节 核酸类药物 核酸类药物可分为两类：一类为具有天然结构的核酸类物质，有助于改善机体的物质代谢和能量平衡，加速受损组织的修复，促进缺氧组织恢复正常生理机能。临床上用于放射病，血小板减少症，急慢性肝炎，心血管疾病，肌肉萎缩等代谢障碍。如肌苷，ATP，辅酶A，脱氧核苷酸，肌苷酸等 第二类为自然结构碱基、核苷、核苷酸结构的类似物或聚合物，这一类核酸类药物是当今治疗病毒，肿瘤，艾滋病得重要手段，也是产生干扰素、免疫抑制的临床药物。已经正式在临床应用的8个抗病毒核苷酸类药物。 一、叠氮胸苷（AZT） （一）结构与性质 AZT治疗艾滋病的新药。化学名为3‘－叠氮－2’－脱氧胸腺嘧啶核苷，商品名为Refrovir。 68％的病人临床表现为减轻症状，延长寿命的显著效果，常见副作用为贫血，白血球减少，部分病人骨髓坏死等。 AZT的药理作用是在体内经磷酸化后生成了3‘－叠氮－2’－脱氧胸腺嘧啶核苷酸，取代了正常的胸腺嘧啶核苷酸参与病毒DNA的合成，含有AZT成分DNA不能继续复制，从而达到阻止病毒增殖的目的。 （二）生产工艺 二、阿糖腺苷 （一）结构与性质 阿糖腺苷的化学名称为9－β－D－阿拉伯呋喃糖腺嘌呤。 阿糖腺苷是近年来引人注目的广谱DNA病毒抑制剂，对单纯疱疹ⅠⅡ型，带状疱疹，巨细，牛痘等DNA病毒，在体内外都有明显抑制作用。 阿糖腺苷在体内受激酶作用生成阿糖腺三磷，是脱氧腺三磷（dATP）的拮抗物，从而抑制了以dATP为底物的病毒DNA聚合酶的活力。 （二）生产工艺 三、三氮唑核苷（Ribavirin，利巴伟林） （一）结构与性质 三氮唑核苷商品名病毒唑，对DNA病毒，RNA病毒都具有广泛作