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选修三 现代生物科技专题 【第一讲】 基因工程 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，又叫DNA重组技术。 1．限制性核酸内切酶 识别序列的特点：呈现碱基互补对称，无论是奇数个碱基还是偶数个碱基，都可以找到一条中心轴线， 如图，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。如以中心线为轴，两侧碱基互补对称； 以为轴，两侧碱基互补对称。 切割后产生末端的种类——黏性末端和平末端。 ①黏性末端：是限制酶在它识别序列的中轴线两侧将DNA的两条链分别切开时形成的错位切，如下图所示： ②平末端：是限制酶在识别序列的中轴线切开时形成的平切，如下图所示： 2．限制酶与DNA连接酶的关系 易误提醒关于工具酶的五个注意点 限制酶切割位点所处的位置必须是在所需的标记基因之外，这样才能保证标记基因的完整性， 有利于对目的基因的检测。 为使目的基因与载体形成相同的DNA片段末端连接，通常使用同一种限制酶将二者切割， 但如果不同的限制酶切割DNA分子所产生的末端也存在互补关系时，则两末端也可连接。 限制酶不切割自身DNA的原因是原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。 限制酶是一类酶，而不是一种酶。DNA连接酶起作用时，不需要模板。 DNA分子 磷酸二酯键 形成黏性末端或平末端 DNA连接酶 DNA分子片段 磷酸二酯键 形成重组DNA分子 DNA聚合酶 脱氧核苷酸 磷酸二酯键 形成新的DNA分子 DNA（水解）酶 DNA分子 磷酸二酯键 形成脱氧核苷酸 解旋酶 DNA分子 碱基对间的氢键 形成单链DNA分子 3．载体具备的条件 条件 目的 稳定并能复制 目的基因稳定存在且数量可扩大 有一个至多个限制酶切割位点 可携带多个或多种外源基因 具有特殊的标记基因 便于重组DNA的鉴定和选择 二基因工程的基本操作程序 1．目的基因的获取 直接分离人工合成 DNA复制 相 同 点 原理 DNA双链复制（碱基互补配对） 原料 四种游离的脱氧核苷酸 条件 模板、ATP、酶等 2．基因表达载体的构建 基因表达载体的组成及作用：构建过程： 3．将目的基因导入受体细胞 生物种类 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 常用方法 农杆菌转化法 显微注射技术 感受态细胞法 受体细胞 体细胞 受精卵 原核细胞 转化过程 将目的基因插入到Ti质粒的TDNA上→农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞的染色体DNA上→表达 将含有目的基因的表达载体提纯→取卵受精卵→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物 Ca2＋处理细胞→感受态细胞→重组表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子 4．目的基因的检测与鉴定 拓展深化关于操作过程的个注意点①只有第三步将目的基因导入受体细胞不需碱基互补配对，其余三个步骤都涉及碱基互补配对第一步存在逆转录法获得DNA，第二步存在黏性末端连接现象，第四步存在检测分子水平杂交。 ②工具酶只有两种：限制酶在操作程序1、2中用到且要求用同一种，目的是产生相同的黏性末端； DNA连接酶只在操作程序2中用到。 ③目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称为转化。 转化的实质是目的基因整合到受体细胞染色体基因组中。 ④限制酶剪切目的基因与质粒的次数不同：获取一个目的基因需限制酶剪切2次，共产生4个黏性末端或平末端， 切割质粒则只需要限制酶剪切1次，因为质粒是环状DNA分子，而目的基因在DNA分子链上。 ⑤切割目的基因和载体并非只能用同一种限制酶：如果用两种不同限制酶切割后形成的黏性末端相同时， 在DNA连接酶的作用下目的基因与载体也可以连接起来。 ⑥目的基因的插入点不是随意的：基因表达需要启动子与终止子的调控， 所以目的基因应插入到启动子与终止子之间的部位。 三蛋白质工程 蛋白质工程与基因工程的关系 项目 蛋白质工程 基因工程 区 别 过 程 预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到相对应的脱氧核苷酸序列 获取目的基因→构建基因表达载体→将目的基因导入受体细胞→ 目的基因的检测与鉴定 实 质 定向改造或生产人类所需的蛋白质 定向改造生物的遗传特性，以获得人类所需的生物类型或生物产品 结果 可生产自然界没有的蛋白质 只能生产自然界已有的蛋白质 联系 ①蛋白质工程是在基因工程基础上延伸出来的第二代基因工程 ②基因工程中所利用的某些酶需要通过蛋白质工程进行修饰、改造 基因工程的理论基础 五、基因工程的应用成果（上图右） 1．乳腺生物反应器与微生物生产的比较