高二生物：1.2《基因工程的基本操作程序》精品课件(新人教版选修3)要点.ppt

例1（多选）一个基因表达载体的构建应包括( ) A．目的基因 B．启动子 C．终止子 D．标记基因 ABC D 例2.下列关于基因表达载体的叙述不正确的是( ) A．启动子是与RNA聚合酶识别和结合的部位，是起始密码 B．启动子和终止子都是特殊结构的DNA短片段，对mRNA的转录起调控作用 C．标记基因是为了鉴别受体细胞中是否有目的基因从而便于筛选 D．基因表达载体的构建视受体细胞及导入方式不同而有所差别 A 常用的受体细胞： 原核生物：大肠杆菌 枯草杆菌 土壤农杆菌 真核生物：酵母菌和动植物细胞 将目的基因导入受体细胞的原理 借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。 三.将目的基因导入受体细胞 转化： 目的基因进入_________内，并且在 受体细胞内维持_____和_____的过程 受体细胞 稳定 表达 1、将目的基因导入植物细胞 （1）农杆菌转化法 特点: 能感染双子叶植物和祼子植物,对大多数单子叶植物无感染能力 Ti质粒的T—DNA可转移至受体细胞并整合到其染色体上 转化过程: Ti质粒 目的基因 构建 表达载体 导入 植物细胞 整合 植物细胞染色体DNA 表达 新性状 转入 农杆菌 整合到染色体上 转移至受体细胞 （2）基因枪法——微弹轰击法 特点：成本高 适用于单子叶植物 胚珠 花药 花丝 柱头 花柱 子房壁 子房 雄蕊 雌蕊 （3）花粉通道法 植物花粉在柱头上萌发后，花粉管要穿过花柱直通胚囊。花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去柱头，然后，滴加DNA（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。 我国转基因抗虫棉就是用这种方法获得 特点：简便经济 例3.采用基因工程的方法培育抗虫棉，下列导入目的基因的做法正确的是（ ） ①将毒素蛋白质注射到棉受精卵中 ②将编码毒素蛋白的DNA序列注射到棉受精卵中 ③将编码毒素蛋白的DNA序列与细菌质粒重组，注射到棉的子房并进入受精卵中 ④将编码毒素蛋白的DNA序列与质粒重组，导人细菌感染棉的体细胞，再进行组织培养 A．①② B．②③ C．③④ D．①④ C 2、将目的基因导入动物细胞 方法: 显微注射技术 操作程序: 提纯含目的基因表达载体 取受精卵 显微注射 移植到子宫 早期胚胎 新性状动物 3、将目的基因导入微生物细胞 常用法：Ca2+处理 常用菌：大肠杆菌 经常用原核生物作受体细胞原因： 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少 过程： Ca2+处理大肠杆菌 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA 将目的基因导入受体细胞 1.将目的基因导入植物细胞 转化 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 2.将目的基因导入动物细胞 显微注射技术 3.将目的基因导入微生物细胞 Ca2+处理 受体细胞 常用方法 微生物基因工程 动物基因工程 植物基因工程 比较目的基因导入不同细胞的方法 农杆菌转化法 显微注射法 Ca2+处理法 体细胞 受精卵 原核细胞 四.目的基因的检测与鉴定 抗虫鉴定 抗病鉴定 活性鉴定等 抗原－抗体杂交法 DNA-RNA分子杂交法 DNA分子杂交法 受体是否具有 转基因特征 个体水平 目的基因是否翻译 目的基因是否转录 目的基因是否导入 分子水平 方法 检测对象 * 导入 接种培养 接种培养 接种培养 含有四环素的完全培养基 完全培养基 大肠杆菌不含抗四环素基因 证明： 不存活 含有四环素的完全培养基 证明： 大肠杆菌的受体细胞含有目的基因 四环素抗性基因 四环素抗性基因 存活 如何把导入了目的基因的受体细胞筛选出来？ 存活 1.2 基因工程的基本操作程序 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 基因工程基本操作的四个步骤 一、目的基因的获取 编码蛋白质的基因 （二）、获取目的基因的常用方法有哪些? 1、从基因文库中获取 2、利用PCR技术扩增 3、人工合成 如：与生物抗性相关的基因、与优良品质相关的基因、与生物药物和保健品相关的基因、与毒物降解相关的基因、与工业用酶相关的基因。 也可以是一些具有调控作用的因子 (一)、目的基因主要是______________________ 1.从基因文库中获取目的基因 （1）.基因文库 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 种类 基因组文库：含有一种生物的全部基因 部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因， 如：cDNA文库 提取某种生物的全部DNA