【2017年整理】乳房Paget病肿瘤组织中Bcl-2、Bax、雌激素和孕激素受体表达的研究.docx.docxVIP

乳房Paget病肿瘤组织中Bcl－2、Bax、雌激素和孕激素受体表达的研究乳房Paget病肿瘤组织中Bcl－2、Bax、雌激素和孕激素受体表达的研究中华皮肤科杂志 2000年第2期第33卷 短篇论著作者：方红　孙国均　沈奇范单位：方红　沈奇范（310003　杭州市，浙江大学医学院附属第一医院皮肤科）；孙国均（附属第二医院皮肤科）乳房Paget病(MPD)是一种特殊类型的皮肤肿瘤，患者往往合并下方乳腺癌。近年来，乳腺肿瘤组织中癌基因、抑癌基因以及凋亡相关基因研究报道日益增多，揭示乳腺癌的发生发展涉及到上述基因之间的相互作用。我们采用SP免疫组化方法，观察Bcl－2、Bax在MPD及其下方乳腺癌中的表达，并与雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）的表达情况进行比较，旨在探讨凋亡相关基因与MPD的发病关系以及MPD与下方乳腺癌之间的关系。一、材料与方法1.标本：MPD患者26例，均为女性，年龄30～77岁，平均诊断年龄56.5岁。左侧乳头及乳晕病变14例，右侧乳头及乳晕病变12例。正常人对照5例，取自成人躯干部,为外科整形切除多余之皮肤标本。2.试剂：第一抗体抗Bcl－2（N－19）和抗Bax（N－20）抗体为兔抗人多克隆抗体；第一抗体抗ER和抗PR抗体为鼠抗人单克隆抗体。所有抗体均为美国SantaCruz公司产品，购自北京中山生物技术公司。3.标本均经3.33mol/L(10％)中性福尔马林固定，石蜡包埋。连续组织切片厚4μm,分别进行HE染色及免疫组化染色。免疫组化步骤：脱蜡至水后加枸橼酸缓冲液10mmol/L（pH6.0）95℃10min，正常羊血清封闭15min，分别加入4种一抗（浓度均为1∶100），室温孵育4h，加生物素－SP标记二抗，室温孵育30min。DAB显色，苏木素复染封片。上述各步骤间均用PBS洗涤3次，每次5min。用已知阳性切片作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。4.结果判断标准：根据Paget细胞及乳腺癌细胞着染数目及染色深浅分别记0～3分。着染细胞数目超过肿瘤细胞数＞50％3分，25％～50％2分，5％～24％1分，＜5％为0分。染色深度以多数细胞的呈色反应为准：深棕色为3分，棕黄色2分，淡棕色1分，不着色0分。上述2项指标积分数分4级：强阳性（＋＋＋）5～6分，阳性（＋＋）3～4分，弱阳性（＋）2分，阴性（－）0分。5.统计学处理：采用计算机SPSS统计软件包的联列表资料χ2检验法。二、结果1.病理形态：所有病例均在表皮见到典型Paget细胞。5例为单纯MPD,21例系MPD合并下方乳腺癌，其中浸润性导管癌10例，单纯癌4例，导管内癌7例。高分化者16例，大多数Paget细胞核淡染居中，核浆比例小，分裂象少见，Paget细胞呈散在或小巢状分布；低分化者10例，多数Paget细胞核深染偏位，细胞呈印戒状，分裂象易见，细胞呈巢或呈腺泡或腺管状结构。2.免疫组化染色结果：Bcl－2和Bax阳性染色以细胞浆为主，呈棕黄色颗粒着色；ER、PR阳性染色为细胞浆及细胞核棕黄色颗粒着色。26例MPD中，Bcl－2蛋白表达阳性16例，阳性率为61.5％；Bax蛋白表达阳性19例，阳性率为73.1％；ER阳性18例，阳性率69.2％；PR阳性17例，阳性率65.4％，详见表1。一些病例Paget细胞同时表达2种或2种以上蛋白，Paget细胞同时表达Bcl－2与Bax或ER或PR蛋白情况详见表2。21例Paget病合并下方乳腺癌，其乳腺癌细胞Bcl－2、Bax、ER和PR的表达阳性率分别为81.0％、85.7％、71.4％和71.4％。正常人皮肤基底细胞可见Bcl－2阳性表达，其上方角质形成细胞则呈阴性表达，而Bax阳性表达见于表皮上层邻近角质层及角质层。正常皮肤角质形成细胞及大小汗腺均不表达ER、PR。表1Bcl－2、Bax、雌激素受体和孕激素受体在乳房Paget病中的表达组 别例数Bcl－2Bax雌激素受体孕激素受体-＋＋＋＋＋＋-＋＋＋＋＋＋-＋＋＋＋＋＋-＋＋＋＋＋＋高分化组1638505641311114921低分化组107300244053115410合 计26101150710818142291331表2　乳房Paget病中Bcl－2分别与Bax、雌激素受体、孕激素受体同时表达(％)组 别例数Bax雌激素受体孕激素受体高分化组1610(62.5)11(68.8)10(62.5)低分化组102(20.0)2(20.0)2(20.0)合 计2612(46.2)13(50.0)12(46.2)三、讨论本文结果与文献报道乳腺癌的表达结果相类似。乳腺癌细胞Bcl－2表达与预后好的临床及组织学指标呈正相关。而Bax的表达则与肿瘤组织学分型、分级、ER、PR等无关。研究显示，乳腺癌细胞同时表达Bcl－2与Bax和细胞的