形态学实验技术[精选].ppt

* * * * * * * * * * * CD30何杰金氏淋巴瘤 R-S细胞标记物。 * CD44v6为细胞粘附分子类抗体，是一种转移相关因子。 * * PR (孕激素受体) 经典的克隆号1A6 * * MAP-2ab（Microtubule-associated protein微管相关蛋白） 中文检索文献共4篇 为正常神经元细胞和树突细胞的标记物，可与GFAP联合应 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * ER（雌激素受体） 不同ER的区别点 ER克隆号：1D5, 6F11,与组合型1D5+6F11， 1D5, 6F11的为分子量均为67kDa。ER基因为140 kb DNA基因片段，由8个外显子组成，在调控蛋白转录中有6个不连续的功能区，1D5作用位点在N-端的(A/B)区，6F11的功能区为A到F的不连续的功能区。1D5为全球通用 金标准，组合型1D5+6F11增加ER的结合位点。 * * * 　　对免疫细胞化学结果的判断应持科学的慎重态度，要准确判断阳性和阴性，排除假阳性和假阴性结果，必须严格对照实验，对新发现的阳性结果，除有对照试验结果外，应进行多次重复实验，要求用几种方法进行验证，如用PAP法阳性，可再用ABC法验证。必须学会判断特异性染色和非特异性染色，对初学者更为重要，否则会得出不科学的结论。 免疫细胞化学结果的判断 阳性细胞的染色特征 　　免疫细胞化学的呈色深浅可反映抗原存在的数量，可作为定性、定位和定量的依据。阳性细胞染色分布有三种类型 　　① 胞浆；② 细胞核；③ 细胞膜表面。 大部分位于胞浆；灶性或弥漫性；由于细胞内抗原量不同，染色强度也不一；阳性细胞定位于单个细胞，与阴性细胞交织分布；切片边缘、刀痕处染色强度加深，不能用于判断阳性。 Rb2/P130 有两种方法：一是对检测结果阳性细胞指数来定性。判断方法是以一个视野中的阳性细胞数与总细胞的百分比，再取10个相同视野算去平均数。另一种方法是以染色阳性强度和阳性检出率相结合而定，一般阳性细胞数在0—25%为阴性，25—50%为阳性+，50—75%为阳性++，75%以上为阳性+++。第二种方法易出现人为误差。用图像分析系统进行结果检测的定量分析更为准确。 结果统计： 实验设计 根据课题要求，通过查阅文献选出具有代表意义的较新的抗体，通过合适的联系方式确定抗体的出处，购买方式及到货日期。在每次染色或每一批染色前，都应列出实验计划，做好免疫组化标记记录单，拿到的任何一种抗体都应首先进行预实验，以确定正式实验中抗原的修复方式、抗体的最佳稀释度及孵育时间等，然后才能进行大批的实验。 * * * * * * * * * * * * * * * * * uoshuiji * * * * * * * 第二代聚合酶两步法( Envision) DaKO Envision显色系统是2001年投入美国市场的，2002年引入中国，它是将二抗和酶通过一个多聚葡聚糖骨架联接成一个多聚体(Envision)，把传统的二抗、三抗分别孵育合成一次孵育，由于不再有二抗三抗通过生物素的结合，故整个系统不受内源性生物素的干扰，是一个高敏感性显色系统。此方法由于简单、快速、敏感性强且避免了内源性生物素所造成的背景染色，有逐渐取代其他免疫酶组织化学检测方法的趋势。 Envision 法 Envision 法操作流程 1. 石蜡切片脱蜡至PBS。 2.0.3％H2O2甲醇液或3％H2O2室温孵育20min。 3.抗原修复。 4.滴加适当稀释的一抗370C 60min或40C过夜。 5.PBS洗涤。 6.EnVision 370C 孵育30min或室温60min。 7.PBS洗涤。 8.DAB(0.04%)显色（镜检控制），水洗、复染、封片。 何杰金氏淋巴瘤 R-S细胞CD30 甲状腺癌 CD44v6 甲状腺乳头状癌E-cadherin 乳腺浸润性导管癌PR 乙型肝炎HBsAg 脑胶质瘤MAP 2ab 免疫组化染色应注意 免疫组化染色方法已不是什么很难的问题，操作步骤简单也易掌握,但要染好免疫组化,其中方法的技巧将是每位操作者在实际工作不断摸索和探讨的事,但最基本的应从以下方面加以注意。 提高免疫组化敏感性的方法 概述：提高免疫组化敏感性有两种途径，一是增加IHC方法的敏感性，如二步法较三步法的敏感性较为显著提高；另一途径是通过对石蜡切片酶消化和热处理是IHC检测敏感性大为提高。抗原热修复是甲醛固定组织后