流式原理培训解读.pptVIP

细胞凋亡多事件发生 早期：AnnexinV（PS外翻） 早中期：JC-1( 线粒体膜电位) 中晚期：caspase-3、8、9（western） 晚期： TUNEL （ DNA 片段） 不同时期凋亡检测指标 早期凋亡特征： 磷脂膜（PS）外翻，但是细胞膜保持完整性，因此 PI染色为阴性 DNA没有发生断裂 AnnexinV（磷脂结合蛋白） 对照设置： 空白对照：不加AnnexinV/PI,用以调节电压，阴阳性细胞界限 单阳对照：诱导凋亡，AnnexinV/ PI单染，用来补偿 双染阴性对照：未诱导的 AnnexinV+PI双染。用它确定两荧光通道电压，排除非特异性结合 注意： 细胞制备或存储时细胞膜损伤，造成假阳性 贴壁细胞消化时避免使用EDTA，螯合钙离子 当样本表达GFP时，禁用AnnexinV-FITC 推荐使用AnnexinV-APC/7-AAD染色 JC-1(BIC2)检测线粒体膜电位变化 原理：JC-1有单体跟多聚体两种形式。浓度高时，JC-1呈多聚体，可以产生红色荧光；在浓度较低时，JC-1为单体，可以产生绿色荧光。 正常细胞：膜电位正常， JC-1随线粒体膜极性进入线粒体，随浓度升高而成多聚体，发红色荧光。 凋亡细胞：线粒体膜去极化， JC-1从线粒体释放，浓度降低，转为单体，发绿色荧光。通过检测红绿两种荧光区分。 Caspase-3检测 -细胞凋