流式细胞仪原理及应用(HIV)解读.pptVIP

光学系统 电子系统 当细胞携带荧光素标记物, 通过激光照射区时, 受激激发, 产生代表细胞内不同物质、不同波长的荧光信号, 这些信号经A/D转换成数字信号, 送计算机进行储存、 作图、 统计分析 发射波长 Wavelength (nm) 400 450 500 550 600 650 700 1000 800 600 400 200 0 PE FITC PerCP 750 流式细胞仪原理 荧光信号 650nm 700nm FL3 650 and Above 500nm 600nm FL1 530/30 FL2 585/42 Relative Intensity FITC PE PerCP Wavelength (nm) 550nm 检测器 Photomultiplier tube (PMT) 将光学信号转变为电脉冲(数字数据)信号 单平台绝对计数 管中预先加有准确定量的Beads 流式细胞仪获取数据后，由各目标群的含量，可以计算出相对含量% 由各目标群与Beads的相对量计算，得到该细胞群的绝对含量 计算公式： 细胞获取数 Beads总量 细胞/?L= ?????? ? ?????? Beads获取数 样本量 注： Beads总量见TruCOUNT管外包装 MultiSET系统中，样本量为50 ?L 单平