正相色谱柱的使用[精选].ppt

活化注意要点： 1、保存溶剂：一般正相新柱出厂是用95%的正己烷：5%乙醇或纯异丙醇或正己烷保存； 例外：比如氰基柱既可以用作正相柱，也可以用作反相柱，一些厂家就用纯甲醇封柱。 2、异丙醇过渡：粘度大高柱压；小流速：0.2mL·min-1；先流路后过柱；约0.5h后换上流动相；若有缓冲盐，则应先用不含盐的同比例的流动相过柱，避免析出。 氨基柱使用后冲洗 色谱柱再生 * 正相液相色谱柱的使用与维护 色谱柱分类 正相色谱柱活化 色谱柱冲洗与再生 样品 溶于有机溶剂 溶于水 溶于四氢呋喃 非离子化 离子化 溶于有机溶剂 溶于水 溶于正己烷 溶于甲醇或甲醇/水 或乙腈或乙腈/水 用硅胶的正相模式 用键合相的正相模式 用键合相的反相模式 用键合相的反相模式 低分子凝胶渗透色谱 用键合相的反相模式 抑制电离反相键合相色谱 离子对键合相的反相模式 用硅胶的正相模式 离子交换模式 凝胶渗透色谱 凝胶过滤色谱 大孔填料的离子交换模式 用大孔填料的反相模式 分子量2000 分子量2000 分离模式的选择 正相色谱 20% 反相色谱 80% 正相吸附色谱 极性:固定相 流动相 固定相 - 极性 流动相(己烷, 庚烷)- 非极性 极性物质后出峰 正相色谱 正相色谱柱的特点 正相色谱比反相色谱柱压低 使用的溶剂容易旋蒸除去 吡咯等蒸发性溶剂彻底改善了碱性有 机化合物在B型球形硅胶, Diol和PEG 正相液相色谱柱上的峰形。 色谱柱的分类 按固定相作用性质分类 高效反相液相色谱柱 高效正相液相色谱柱 高效亲水液相色谱柱 高效离子交换液相色谱柱 InnovationTM高效多功能液相色谱柱 高效手性液相色谱柱 高效GPC凝胶液相色谱柱 高效Hilic液相色谱柱 色谱柱的分类 按基质材料分类 硅胶基质柱 聚合物柱 ZrO2柱等 按柱子尺 寸分类 毛细管柱 微柱 窄径柱 常规柱 制备柱 半制备柱 色谱柱的分类 正相液相色谱柱 1、氨基柱 2、硅胶柱 4、Diol柱 3、氰基柱 正反相使用均可 绝不可沾水 正反相使用均可 正相色谱柱的活化 氨基柱柱效检测 流动相：10％乙酸乙酯＋90％正己烷 流速：1.0mL·min-1 标准溶液：乙苯（或甲苯）＋苯甲酸甲酯 检测波长：254nm 参考(标准JB5226-91)液相色谱仪测试用标准色谱 柱 此方法同时适用氰基柱、硅胶柱 正相条件适用后： 首先50倍柱体积异丙醇（注意低流速） 其次50倍柱体积甲醇 最后异丙醇过渡到正相流动相条件 柱子长期不用的情况下，冲洗干净后用异丙醇或者正己烷保存。 柱子使用一定时间后：柱效下降、老化，可以用以下方法清洗柱子恢复柱性能 方案1：依次用甲醇、异丙醇、氯仿、正己烷、氯仿、异丙醇、甲醇冲柱子（各以0.5ml/min的流速，20倍柱体积），再换流动相 *