1微生物的实验室培养辩析.ppt

大肠杆菌 毛霉 酵母菌 课题1 微生物的实验室培养 1.提供营养和条件 2.防止污染 一、基础知识 （一）培养基 是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养物质。 1.分类 液体培养基 固体培养基 在液体培养基中加入凝固剂琼脂配制成的固体状态的基质 菌落 单个微生物在固体培养基上大量繁殖时，形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落 菌落特征是鉴定菌种的重要依据 一般的培养基都含有碳源、氮源、无机盐和水等 2.培养基的基本成分 牛肉膏蛋白胨培养基 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方 H2O 定容至1000ml Nacl 5g 蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 琼脂20.0g 1.消毒： 　　利用较为温和的化学或物理方法，杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）的过程。 （二）无菌技术 2.灭菌： 　　用强烈的理化因素杀死物体内外所有微生物（包括芽孢和孢子），而达到完全无菌的过程。 (1)消毒的方法： 常用的消毒与灭菌的方法 1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min； 2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或 80℃下煮15min； 3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔 灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源； 4、紫外线消毒； …… 1、灼烧灭菌 2、干热灭菌：160-170 ℃下加热1-2h。 3、高压蒸汽灭菌：100kPa、121 ℃下维持15-30min. (2)灭菌的方法： 1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？ 2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手 答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。 二、实验操作 本实验采用牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌的纯化培养，实验过程分为两个阶段： 1、制备培养基 2、纯化大肠杆菌 大肠杆菌 1、制备培养基 （1）计算 根据下列培养基配方比例，计算配制100mL培养基时，各成分的用量。 牛肉膏蛋白胨固体培养基配方（1000ml） 牛肉膏 5.0g 蛋白胨 10.0g NaCl 5.0g 琼脂 20.0g （2）称量 蛋白胨 牛肉膏 琼脂 （3）溶化 ①加水加热熔化牛肉膏；②加入蛋白胨和氯化钠继续加热；③加入琼脂；④用蒸馏水定容到100mL。整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。 （4）灭菌 在压力为100kPa，温度为121℃条件下，灭菌15-30min。 （5）倒平板 约50℃ 防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染 灼烧灭菌， 防止瓶口的微生物污染培养基 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 答：既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染，又可以避免培养基中的水分过快地挥发。 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。 讨论 微生物接种方法： 平板划线法和稀释涂布平板法 2、纯化大肠杆菌 平板划线法 通过接种环在固体培养基表面连续画线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，数次画线后，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体（菌落）。 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 操作的第一步灼烧接种环：避免接种环上可能存在的微生物污染培养物； 每次划线前灼烧接种环：杀死上次划线后接种环上残留的菌种，保证下一次划线时，菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。 划线结束后灼烧接种环：及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 培养基表面的单菌落 稀释涂布平板法 6支试管，分别加入9ml无菌水 1ml 101 1m