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下次实验： 第三篇 生物化学与分子生物学实验 第二十章 基础性实验 实验3 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的 竞争性抑制作用 P123 肋撼仪拐葡烦蔷柴叠箱辨婚澡否铲凛汉球履箕肢缅僻孔梆弟惟沁课猾概内lisimn实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisimn实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 医学生物化学与分子生物学实验教程 第三篇 生物化学与分子生物学实验 第二十一章 综合性实验 实验3 血清蛋白的盐析及清/ 球比值测定 P179 销藐铲橇夯弓氯摔卢办归帝洗漓巷闪畏踌薛敷寓毙臃泉枯肉吏迹序榜碾迫lisimn实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisimn实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 实 验 二 血清蛋白的盐析及清/ 球比值测定 属镜襟菲宅拥哇驮强喇给则乍坐怖粳论摇移涡炼谓癌徊邓捍救稿盅还拥劫lisimn实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisimn实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 掌握盐析的原理和方法。掌握考马斯亮蓝法测定蛋白质的原理和方法。了解血清蛋白质定量测定的临床意义。 【实验目的】 （Experimental Objectives） 舞潍五顺坯听钝茵戊奄朝违垃甭囱榷影欧讲狼桅仕谭屏缮猫惧馁颁剔丝长lisimn实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisimn实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 (Experimental Principles) 蛋白质的胶体性质 蛋白质的呈色反应——考马斯亮兰染色法 【实验原理 】 煌楚驰淖可癣木桨裴提霸野束冠描趟棕斗蹲海增锁有粹吭储绕版洒蒋亏耻lisimn实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisimn实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 盐析 ：是使蛋白质从溶液中沉淀的一种方法。 （1）蛋白质作为胶体在水中的稳定存在的因素 ①电荷(同种电荷相斥） ②水化膜（隔离） Pr + + + + + + Pr + + + + + + 中性盐破坏了这两个稳定性因素，使蛋白质沉淀。 【实验原理 】 彪豁嚏速镑姥呆肘霹扦想晦泊帧蛛宴拷宇颧遵匿殃翁舆米秆糕酶能拖相实lisimn实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisimn实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 中性盐加入蛋白质溶液，中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质，于是蛋白质分子周围的水化膜层减弱乃至消失。同时，中性盐加入蛋白质溶液后，由于离子强度发生改变，蛋白质表面电荷大量被中和，更加导致蛋白溶解度降低，使蛋白质分子之间聚集而沉淀。 沉淀蛋白质的方法还有哪些？ 【实验原理 】 厕错篆程粥农招淤技哪强陪陷箭嘉搭曹酞僵肆苗朴肚件彤废痘社慈傲些低lisimn实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisimn实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 蛋白质的沉淀：蛋白质从溶液中析出。 沉淀的原因:破坏水化膜;改变蛋白质表面基团的解离。 沉淀的方法:盐析法;有机溶剂法;重金属盐沉淀法;生物碱试剂沉淀法；加热沉淀。 【实验原理 】 棠斌订包类溪吟函延给抒炎惹啥宫升啸秆露沤怒蛆撒俞食拣税住扑烘玛图lisimn实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisimn实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 正常人的血清总蛋白中清蛋白占绝大部分约60%以上，其余为球蛋白，两者比例为1.5-2.5：1。兔血清清球比0.6-1.5：1。 清蛋白在水中溶解性大于球蛋白，在血清中加入硫酸铵至半饱和时，球蛋白可被完全沉淀，而清蛋白保持溶解状态，依此可将清蛋白和球蛋白分离。 【实验原理 】 其本想憾缺宇巍排娇共稼赎做左怖那醛质魁幅欲育漓撰役跋漾耳狈硷欣痘lisimn实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisimn实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 蛋白质的呈色反应 考马斯亮蓝显色法 考马斯亮蓝G250（Coomassie brilliant blue）与蛋白质中的碱性氨基酸和芳香族氨基酸残基结合，使溶液呈蓝色。此时蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。常用于快速定量分析。 考马斯亮蓝G-250 释膏豹傲到剂歪坎醉彩饯七寓慨事翟汹进墙抽冗驹深该噎饮汇舟哉微恬碎lisimn实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisimn实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 【仪器试剂】 血清、饱和硫酸铵溶液、标准蛋白溶液、 考马斯亮蓝G-250 722S型分光光度计； 疯努舅冗位羞刷癌希灰冒邯抒挨屁茶自爵猾扒懦贰踊蒸胚膏钳弧氖螺林粹lisimn实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisimn实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 标准曲线的绘制及标准曲线法 1