第8讲植组织器官培养生产代谢产物 2.ppt

G A3（赤霉素）对水母雪莲毛状根侧 根的产生有强烈促进作用，GA3浓度为 0.5mg/L时，毛状根生长量达到 9.1g/L(DW)，是基本培养条件下的1.2 倍;总黄酮合成量达到936mg/L。 0.5mg/LGA3和0.5mg/LIBA（3-吲哚丁 酸）组合对毛状根生长和总黄酮合成 最有利，生长量为12.6g/L(DW)，比基 本培养条件时提高了70%;总黄酮合成 量为1287mg/L。 NOTE：NAA(萘乙酸)； IBA(3-吲哚丁 酸)； IAA（吲哚乙酸）； BA（6-苄氨 基嘌呤） 结论 上节例子反应器悬浮培养细胞：3.0%黄酮 3.讨论 现状： 目前转化成功毛状根的植物有200多种， 但如何使其规模化生产有用的次生代谢产 物报道较少。 课堂讨论题： 你认为植物毛状根培养的最大限制或问 题在哪里？ 毛状根生产次级代谢产物的影响因素 当前制约毛状根在药用植物有效成分生产中应用 的主要因素： 毛状根诱导率 毛状根发酵培养技术：一些物理因素(如光强、 温度)和化学因素(如培养基、碳源、氮源、激素 、前体、诱导子等)均会对毛状根的增殖和次生 代谢物质的合成产生影响。 生物反应器 生物合成途径不清楚 （1）生物因素 毛状根诱导及高产单克隆根系的筛选： A不同诱导对象 B不同诱导方法 C生长速度、特性（例如：结团性、耐受剪切力） D产物含量 E稳定性 （2）化学因素 A碳源： 作为供应毛状根碳源的糖类较多，但对不同的 单糖、双糖如何影响毛状根生长及其产物合成了 解较少。 对于甜菜毛状根，蔗糖能够快速被利用，其次 为麦芽糖；葡萄糖只能被有限地利用；果糖、乳 糖、半乳糖、木糖、甘油既能抑制毛状根生长， 也能抑制甜菜色有合成。 B氮源： 常采用的无机氮源主要是硝酸盐和铵。硝酸 盐和铵对毛状根生长及其次生代谢产物合成产生 较为重要的调控作用，因此硝酸盐和铵的比例、 总添加量、添加时间对毛状根的影响值得研究。 C激素： 对根的生长产生影响，激素也影响到根中乙烯 的生物合成。 激素与T-DNA区基因的相互作用也起到很大作 用，例如：发根(rol)基因控制激素代谢和生理代 谢，而激素又刺激rol基因的表达. D诱导子： 诱导子 (elicitors)主要是引起植物产生过 敏反应的物质，由于诱导子能引起植物休内特殊 的次生代谢物积累，因此被用于毛状根培养。 E前体： 添加相应的前体可能会增加产物产量，如甜 菜毛根合成甜菜色苷的代谢过程的最后一步主要 由甜菜醛氨酸与氨基酸合成了甜菜色苷，因此添 加氨基酸对提高甜菜色苷产量有帮助。 F过氧化物酶： 毛状根中的一些过氧化物酶类与次生代谢产 物的降解有着密切的联系，如何减低这类氧化酶 的活性从而提高次生代谢产物在毛状根中的积累 量是值得关注的又一热点。 （3）物理因素 A光质： 可见光包括不同波长的光线，因此应当考虑光 源对毛状根生长和合成次生代谢产物产生的影响。 例如：在660nm波长的光线下，青篙毛状根干 重和青篙素含量都达到最大。光敏色素在红光照 射下成为激活状态，使得一些酶的酶活发生改变， 次生代谢产物合成途径因而受到调节。 B温度： 由于正常的植物一天当中受到不同温度、光 强度的影响，次生代谢的变化可能会很大，因此 研究温度模式对毛状根生长和次生代谢的影响则 显得较为重要。 高丽参毛状根研究表明，20℃ (白 天)/13℃ (夜晚)的处理，高丽参毛状根生物量以 及人参皂苷产量达到最大。 （4）毛状根培养的生物反应器 毛状根外型像毛发，容易交织缠绕。毛状根的 特点决定了用于毛状根培养的生物反应器需要 特殊设计。 例如：反应器的内部需要特殊设计满足毛状根 的空间分布的均匀性问题。同时，也要提供合 适的培养液循环与气体供给方式才能满足毛状 根对营养和气体的需求，还要考虑接种、取样 、收获、生物量检测等特殊问题。 传统反应器改造 在搅拌式反应器中用丝网把毛状根与叶轮隔开， 避免了叶轮剪切力的影响。 在鼓泡塔反应器中增加大量的喷头，提高了充 氧效率。 新型反应器设计:超声雾化反应器 1 生物反应器 2 中心筒 3 不锈钢筛网 4 空气出口 5 时间继电器 6 雾化头 7 培养液 8 空气入口 9 空气过滤器 10 流量计 11 电磁阀 12 空气储罐 13 雾化装置 14 40W日光灯 （5）培养方式 A两段培养方法： 初期在采用低剪切力的预培养方法能够提高 毛状根对高剪切力的适应能力，从而增加生物量， 提高次生代谢产物的产量。 B两相培养： 加提取剂常常能够促进产物的生成，有利于 产物回收并抵消反馈抑制。例如：通过添加疏水 性树脂，丹参毛状根生物量增加了3倍，丹参酮产 量增加了15倍，并且添加的X一5树脂能够回收 76.5%的丹参酮。 第8讲 植物组织器官