浙江大学生物化学实验甲 植物不同生长发育期过氧化物酶同工酶谱分析[精选].pptVIP

植物不同生长发育期过氧化物酶同工酶谱分析 1、过氧化物酶简介 过氧化物酶是一类以铁朴啉作为辅基的酶，该酶能 利用H2O2氧化供氢体，酶对H2O2具高度专一性，对供氢 体的要求则较为广泛。酚类、胺类化合物、某些杂环化 合物和一些无机离子等都可作为过氧化物酶的供氢体。 该酶催化的反应可用一通式表示： 过氧化物酶广泛存在于生物界，特别是在高等植物 中，过氧化物酶含量丰富，并具有高度的多型性，即存 在同工酶现象。 植物不同生长发育期过氧化物酶同工酶谱分析 研究表明，在植物不同的生长发育时期和不同的组 织器官中，过氧化物酶同工酶的数目和活性存在较大差 异。种子芽期的过氧化物酶同工酶是种子发育过程中最 稳定、最丰富的时期，可作为研究同工酶的最佳取材时 期。由于该期过氧化物酶同工酶比较稳定，酶带明确， 具有较为明显的品种专一性，因此可作为研究种子分类 的一个生化指标。同时，在种子的生长发育过程中，过 氧化物酶同工酶酶带数目及染色程度深浅均呈有规律的 变化。 以水稻为例，在苗期酶带数目少，酶活性低；在拔 节期酶带数目增多，酶活性增高；到灌浆期酶带数目最 多，酶活性最高。过氧化物酶同工酶这种有规律的变化 可作为一项生理生化指标，用于研究种子的生长发育。 植物不同生长发育期过氧化物酶同工酶谱分析 植物激素可影响过氧化物酶同工酶的酶谱，如吲哚 乙酸可抑制小麦和豌豆中过氧化物酶某些同工酶的表达 。患病、辐射、乙烯处理均能导致过氧化物酶活性迅速 增加。 2、过氧化物酶活性染色原理 根据过氧化物酶能利用H2O2氧化供氢体的反应可测 定该酶的活性。常用的测定过氧化物酶活性的供氢体有 愈创木酚和联苯胺。本试验采用愈创木酚和联苯胺的混 合液，有关反应式如下： 植物不同生长发育期过氧化物酶同工酶谱分析 过氧化物酶同工酶经电泳后，根据分子量和电荷的 不同分成不同的谱带，将电泳后的凝胶用愈创木酚—联 苯胺染色后，在无过氧化物酶的地方，凝胶透明，而在 过氧化物酶谱带处，由于生成紫红色复合物，因此谱带 呈紫红色，这样，在透明背景下出现紫红色条带的地方 ，即为过氧化物酶，由此可测定过氧化物酶同工酶的种 类和数量状况。 3、材料与试剂 试验材料：新鲜植物叶片。 试验试剂：试验试剂及注意事项详见P125。 4、操作方法 操作过程及各步注意事项解说详见P126。 植物不同生长发育期过氧化物酶同工酶谱分析 5、试验结果及处理 仔细观察活性染色后过氧化物酶同工酶谱带的显示 情况，据此绘制过氧化物酶同工酶图谱并对图谱进行简 要说明。 * * AH2 + H2O2 A + 2 H2O E 供氢体 氧化型产物 愈创木酚 + 联苯胺 + H2O2 紫红色复合物 + H2O E