检测生物组织中的还原糖、脂肪、蛋白质辩析.ppt

问题探讨: 1、在做还原糖、蛋白质鉴定的实验时，为什么要留出一部分样液？ * 斐林试剂 苏丹Ⅲ 橘黄色 红色 砖红色沉淀 紫色 苏丹Ⅳ 双缩脲试剂 鉴定物质 试剂 实验现象 还原性糖 脂肪 蛋白质 淀粉 碘 蓝色 实验原理 实验材料的选择 材料的选择 材料的处理 还原性糖的鉴定 脂肪的鉴定 含还原糖高，色浅 如苹果和梨 含脂肪多，色浅 如花生 浸泡3~4小时 / 蛋白质的鉴定 含蛋白质多，色浅 黄豆或鸡蛋清 黄豆需浸泡1-2天，鸡蛋清要先稀释 淀粉的鉴定 含淀粉多，色浅，如马铃薯 / ——白色或近白色，避免颜色的干扰 选材 实验流程(步骤) 1.可溶性还原糖 制备组织样液： 制浆：去皮、切块、研磨， 过滤：（用单层纱布） 取液：（２mL） 显色反应 现象： (用前混匀) 50～65.C水浴 加热2min 还原糖的检测和观察： 还原糖的检测结果 2.脂肪的鉴定 取材：花生种子（浸泡３－４h），去皮，将子叶削成薄片 制片： ①选取最薄的薄片移至载玻片中央 ②在薄片上滴加苏丹Ⅲ(或苏丹Ⅳ) 染液2 － 3滴，染色 ２－３min ③滴加体积分数为50%的酒精溶液1—2滴，洗去浮色 (多余的苏丹Ⅲ ) ④吸去余液，滴1-2滴蒸馏水，盖上盖玻片，制成临时装片 显微观察： 先低倍镜下找到已着色的薄片，后用高倍镜观察 现象： 有被染成橘黄色(或红色)的脂肪微粒 脂肪的检测结果 脂肪微粒 3.蛋白质的鉴定 选材与制备 组织样液： 黄豆组织样液（或鸡蛋蛋清稀释液） 显色反应 现象： 无色 紫色或紫红色 (创设碱性条件) (提供Cu2+) 蛋白质的检测结果 4.淀粉的鉴定 取材：马铃薯匀浆 检测： 碘液2滴 现象： 摇匀后变成蓝色 溶液呈紫色 双缩脲试剂NaOH和CuSO4 蛋白质的鉴定 砖红色沉淀 斐林试剂NaOH和CuSO4 可溶还原糖的鉴定 结果 加热与否 方法 溶液浓度 原理 试剂及成分 比较项目 4、斐林试剂与双缩脲试剂两者有何不同？ 新配制的 Cu(OH)2 溶液 在碱性 环境下 的Cu2+ NaOH 浓度为 0.1g/mL CuS04 浓度为0.05g/mL NaOH 浓度为 0.1g/mL CuS04 浓度为0.01g/mL 先把NaOH 溶液和CuSO4 溶液混合， 而后立即使用。 先加入Na0H 1mL，然后 再加CuS04 4滴，摇匀。 (不能过量) 水浴 加热 不 需 要 作对照 2、使用双缩脲试剂时为什么B液只能加3～4滴而不能 过量？ 过量的双缩脲试剂B会与试剂A反应，使溶液呈蓝色，而掩盖生成的紫色。 3、为什么斐林试剂要现配现用，不能放置太久？ 时间太长，Cu(OH)2悬浊液就沉淀在试管底部而无法参与反应。 深化 *