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第二章 植物组织与细胞培养 2.1 植物组织与细胞培养区别 组织培养概念：指从机体内取出组织或细胞，模拟机体内生理条件，在体外进行培养，使之生存或生长成组织。 细胞培养概念：植物细胞在体外条件下的存活或生长，此时细胞不再形成组织。 White、Gautheret、Nobecourt 等科学家被誉为植物组织培养的奠基人 1957年Skoog和Miller提出了植物激素控制器官形成的概念，指出通过改变培养基中生长素和细胞分裂素的比率，可以控制器官的分化，即生长素和细胞分裂素高促进根的分化，低促进茎和芽的分化。1958年，施图尔德从胡萝卜愈伤组织获得单细胞，并经诱导形成了胚状体再生了植株，是世界上首次证明植物细胞的全能性。 ③迅速发展阶段（60年代后） 1、原生质体培养和细胞融合。 2、微繁技术 植物组织培养理论基础 一、细胞全能性 二.细胞分化 三.离体培养中细胞的脱分化、再分化 植物细胞全能性表现根据细胞类型不同从强到弱: 营养生长中心 形成层 薄壁细胞 厚壁细胞(木质化细胞) 特化细胞(筛管、导管细胞)； 根据细胞所处的组织不同从强到弱为： 顶端分生组织 居间分生组织 侧生分生组织 薄壁组织(基本组织) 厚角组织 输导组织 厚壁组织。  脱分化 再分化 外植体―→愈伤组织 ―→ ↗体细胞胚 ↘  ↘根、茎、叶 等器官再分化时，可经过两条途径 外植体：植物组织培养中用来进行离体无菌培养的离体材料，可以是器官、组织、细胞或原生质体。 愈伤组织：由外植体组织增生的细胞产生的一团不定型的疏散排列的薄壁细胞。 二、细胞分化 分化：细胞的这种在形态结构和功能上发生永久性（不可逆转性）适度变化的过程。 分化的结果导致细胞分裂能力的丧失，伴随的是细胞的分化成熟与组织的形成，是植物根、茎、叶、花、果实和种子的形成，是一个成熟植物体的出现。 三.离体培养中细胞的脱分化、再分化 脱分化：由失去分裂能力的细胞回复到分生性状态并进行分裂，形成无分化的细胞团即愈伤组织的现象。 再分化：由无分化的愈伤组织的细胞再转变成为具有一定结构，执行一定生理功能的组织，构成一个完整的植物体或植物器官的现象 一个已分化细胞要表达出其全能性，就要经过脱分化和再分化的过程，这就是植物组织和细胞培养所要达到的目的。 影响细胞脱分化、再分化的因素 A、激素 生长素能促进维管组织形成 细胞分裂素与木质部的发生有关 b、蔗糖浓度 C、光照与温度光照对于维管组织的分化具有促进作用，适宜的温度对于维管组织的分化是必需的。 再分化时，可经过两条途径 1、器官发生途径 2、体细胞胚胎发生途径 1、器官发生途径 植物的离体器官的发生： 培养条件下的组织或细胞团（愈伤组织）分化形成不定根、不定芽等器官的过程。 离体培养中通过器官发生形成再生植株大体上有四种方式： A: 先芽后根；如小麦，芦荟、苹果 B: 先根后芽；如枸杞、苜蓿 C:在愈伤组织的不同部位形成芽和根，再通过维管组织的联系形成完整植株。如胡萝卜、石刁柏 D:仅有根或芽再生，形成无芽的根或无根的芽。 器官分化的过程: 愈伤组织再分化器官一般要经过三个生长阶段1.外植体经过诱导形成愈伤组织。2.生长中心的形成。当把愈伤组织转移到有利于有序生长的条件下以后，首先在若干部位成丛出现类似形成层的细胞群，称之为生长中心或拟分生组织，它们是愈伤组织形成器官的部位。3.器官原基及器官形成。生长中心形成后，按照其已确立的极性，某些细胞开始分化形成不同的器官原基，进而分化出相应的组织和器官。 2、体细胞胚胎发生途径 胚状体发生途径形成植株的特征 1、具有两极性 细胞发育早期阶段，从其相反的两端分化出芽端与根端，而不定芽和不定根都是单向极性。 2、胚状体的维管组织与外植体的维管组织无解剖结构上的联系，而不定芽和不定根往往总是与愈伤组织的维管组织相联系 3、胚状体的维管组织的分布是独立的“Ｙ”形，而不定芽和不定根的维管组织无此现象。 4、发育过程与合子胚相似。并具有与合子胚类似的形态结构，可独立萌发形成小苗。 2.4 植物组培的实验条件 准备室：进行一切与实验有关的准备工作：器皿洗涤、培养基配制与分装、培养基和培养器皿的灭菌、培养材料的预处理等 要求：20平方米左右。要求宽敞明亮 设备：清洗区，干燥箱，工作台，水箱，天平，灭菌锅等。 无