牛奶DNA提取说明书参考资料.docVIP

牛奶中细菌DNA提取试剂盒 Norgen生产的牛奶细菌DNA提取试剂盒的设计是为快速提取从牛奶中发现的多种细菌DNA基因组而准备的。这个试剂盒可供从牛奶样品中发现的革兰氏阴性和革兰氏阳性菌的DNA基因组。DNA基因组是优先于其他蛋白细胞质中纯化得到的。DNA基因组的标准产量依牛奶样品中细菌的密度和种类不同而不同。纯化的DNA基因组可以被已检测到的限制酶完全消解，并且完全兼容PCR，可以用PCR定量和Southern印迹法分析。 Norgen的提纯技术 纯化是使用Norgen所设计的树脂作为分离基质用旋转柱层层析法进行的。Norgen树脂在高盐浓度下结合DNA，在低盐和弱碱条件下释放已结合的DNA。在牛奶样品中发现的细菌的DNA基因组的提纯过程中的第一步离心牛奶样品以凝集可能存在的细菌。如果DNA是从革兰氏阳性菌或未知菌株中提取，那么凝集团块悬浮在酶切缓冲液中以供分解细菌细胞壁。下一步涉及到的溶解细菌细胞是与提供的裂解缓冲液和蛋白酶K结合，这适合各种细菌。在孵育45分钟后，将结合液和酒精加到裂解物中，并将溶液卡到核酸纯化柱上。Norgen树脂结合DNA的方式取决于离子浓度,因此,DNA将结合到纯化柱上,而大部分的RNA和消化蛋白质会倒掉或留在树脂上部。结合DNA再用提供的清洗缓冲液清洗两遍以除去所有残留杂质，用洗脱缓冲液洗脱纯化的细菌DNA