微生物-培养方法解析.ppt

10-4 、 10-3,、 10-2 常见接种方法 平板划线法： 主要用于分离、纯化培养 稀释涂布平扳法： 主要用于分离菌种并计数 常用方法 微生物培养和组培中的应用 消毒 煮沸 玻璃仪器 紫外线 实验室、操作台、衣物等 酒精溶液 手、外植体等 次氯酸钠溶液等 外植体 灭菌 高压蒸汽 培养基、玻璃仪器、棉塞、牛皮纸等 灼烧 接种环、涂布器 干热 玻璃仪器 选修一 专题2 微生物的培养与应用 微生物的种类 非细胞：病毒； 原核细胞：细菌、蓝藻、放线菌、支原体等。 真核细胞：真菌、原生生物、藻类等。 细菌：大肠杆菌、乳酸菌等 真菌：酵母菌、霉菌； 原生生物：草履虫、变形虫等。 微生物的特点 体积小，面积大 吸收多，转化快 生长旺，繁殖快； 适应强，易变异; 分布广，种类多。 微生物的营养 培养基：碳源、氮源、水、无机盐等。 适宜的环境条件：温度、pH、氧气等。 自养型：无机碳源；异养型：有机碳源。 细菌 (1)结构：单细胞的原核生物，有球形，杆形，螺旋形。 　　基本结构：细胞壁、细胞膜、细胞质、拟核。 　　特殊结构：荚膜、鞭毛、菌毛、芽胞。 　　 (3)繁殖: 二分裂。 菌落 菌落： 单个细菌用肉眼是看不见的，当单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，便会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群落。 　　菌落是菌种鉴定的重要依据。不同种类的细菌菌落的大小，形状光泽度颜色硬度透明度都不同。 培养基的种类及应用 按物理状态不同划分 固体培养基 液体培养基 半固体培养基 按化学组成不同划分：合成培养基/天然培养基 按用途不同划分 鉴别培养基 选择培养基 无菌技术 消毒：不能杀死芽孢和孢子。 煮沸、紫外线、化学药剂 灭菌：能杀死芽孢和孢子。 高压蒸汽灭菌、灼烧、干热、过滤。 配制培养基 包器材 灭菌 菌种扩增 倒平板 接种 培养 观察记录 实验操作——微生物的培养 配制培养基 LB培养基: 蛋白胨： 10g 酵母粉： 5g NaCl： 10g 琼脂： 20g 将上述物质溶解后， 用蒸馏水定容至1000ml， 分装后及时灭菌。 包器材 灭 菌 高压蒸汽灭菌 ： 通过加热使菌体内蛋白质凝固变性，从而达到杀菌目的。 条件：压力100 kPa 温度121 ℃ 时间15-30 min 菌种扩增 摇床震荡培养12h（于LB液体培养基中） 本图来自十一学校 实验用具 LB固体培养基 大肠杆菌菌液（LB液体培养基） 培养皿 接种环 酒精棉 酒精灯 镊子、火柴、记号笔 接种前准备 用肥皂洗手并使用酒精消毒。 顺序： 点燃酒精灯→酒精棉擦拭双手→酒精棉擦拭桌面 倒平板 接种、划线 灼烧接种环→ 取菌液→ 划线分离→ 烧至暗红 接种、划线 灼烧接种环→ 取菌液→ 划线分离→ 菌液膜 接种、划线 灼烧接种环→ 取菌液→ 划线分离→ 接种、划线 ① ③ ② 划线分离 为什么通过划线分离可得到单菌落？ 倒置后做好标记，写在培养皿侧面 划线分离 我们的实验结果 培养 为什么要倒置培养？ 恒温37℃培养 配制菌悬液 1个99ml无菌水 2个9ml无菌水 得10-2, 10-3, 10-4的菌悬液 1g土壤 稀释菌悬液 （10-4） 高浓度→低浓度，换枪头 接种 取200ul菌悬液(10-4) 涂布分离 低浓度→高浓度，可不用换枪头 涂布分离 涂布前后三角刮刀需要灼烧吗？ 37℃倒置培养 按浓度捆成一摞 恒温37℃培养