免疫学检测讲解.ppt

免疫学检测乃借助现代免疫学、细胞生物学和分子生物学理论或技术，对抗原、抗体、免疫细胞及其分泌的细胞因子等进行定性或定量检测。 可用于：免疫相关疾病的诊断 病情检测 疗效评价 特异性(specificity)：是指一种抗原通常仅能与由它刺激所产生的抗体结合，即抗原抗体结合反应的专一性。 比例性(proportionality)：是指抗原与抗体特异性结合反应时, 生成肉眼可见结合物的量与反应物浓度的关系, 只有当二者浓度比例适当时,才出现可见反应。 可逆性(reversibility)：抗原与相应抗体结合成复合物后 , 在一定条件下又可解离为游离抗原与抗体的特性。 （一）凝集反应（agglutination reaction） 　　　　指颗粒性抗原或覆盖可溶性抗原的颗粒性载体与相应抗体结合后，在一定条件下出现肉眼可见的凝集现象。 凝集原（agglutinogen）：反应中的抗原 凝集素（agglutinin）：抗体 凝集反应分类： 直接凝集反应 间接凝集反应 2.间接凝集反应 正向间接凝集试验—检测抗体 Ab＋可溶性Ag→凝集物 3.间接凝集抑制反应Ab＋可溶性Ag→IC ＋致敏载体→不凝集 3. 免疫电泳(immunoeletrophoresis,IEP) 　为琼脂区带电泳和凝胶双扩散相结合的一种免疫技术。 原理:将待检血清标本先进行琼脂凝胶电泳，使血清中各蛋白组分被分成若干区带，然后按电泳方向平行挖一小槽，加入相应抗血清，与已分成区带的各抗原成分在琼脂中作双向免疫扩散，在各区带相应位置形成沉淀弧。 　　临床上常用于骨髓瘤、γ-球蛋白缺乏症、肝脏疾病、白血病、系统性红斑狼疮等患者血清蛋白成分的分析。 1.酶免疫检测技术 用酶作标记物进行的抗原-抗体反应。 是将抗原-抗体反应的特异性与酶催化底物的高效性相结合的免疫检测技术。 定量检测—酶标测定仪 定性检测—可肉眼判定 （1）双抗体夹心法—检测抗原 　　 （2）间接法—检测抗体 荧光素： 异硫氰酸荧光素：呈明亮的黄绿色荧光 四乙基罗丹明：呈橘红色荧光 四甲基异硫氰酸罗丹明：呈橙红色荧光 藻红蛋白：呈红色荧光 荧光免疫技术分为： 荧光免疫显微技术：用于固相标本检测； 主要有直接法、间接法。 荧光免疫测定技术：用于液体标本的检测； 主要有时间分辨荧光免疫测定、 荧光酶免疫测定。 （2）间接荧光法  待测抗原+ 一抗+荧光二抗 荧光效应 优点:敏感度比直接法高，制备一种荧光素标记的  二抗可用于多种抗原的检测.　　 常用标记物： γ型放射性核素： 　　125I、 131I、 51Cr 、 60Co，以125I最常用。 β型放射性核素： 　　　3H 、14C、 32P，以3H最常用。 　　　检测免疫细胞的数量与功能，是判断机体免疫功能状态的重要指标。 　免疫细胞主要来源： 人体—外周血 实验动物—胸腺、脾脏、淋巴结等。 一、外周血单个核细胞的分离 ( peripheral blood mononuclear cell， PBMC ) 常用方法： 葡聚糖-泛影葡胺密度梯度离心法 体外检测淋巴细胞，首先需分离PBMC。 三、免疫细胞功能测定 　　 检测T、B淋巴细胞的功能有助于某些疾病的辅助诊断、疗效观察及科研分析。 　　　 （一） T细胞功能测定　 1. T细胞增殖试验 形态学检查法 3H-TdR掺入法 MTT比色法 2.T细胞分泌细胞因子功能测定 3.特异性抗原皮肤试验 （1）形态学检查法 分离PBMC 与适量PHA混合 37℃，培养72h. 取培养细胞涂片染色 镜检细胞 正常人的T细胞转化率为60％～80％ （2）