11章 antibioti.pptVIP

2009-11-03 色谱柱 葡聚糖凝胶柱 流动相A：含3.5%硫酸铵的0.01mol/L磷酸盐缓冲液（取磷酸氢二钠2.19g和磷酸二氢钠0.54g，加水1000mL使溶解，调节pH值至7.0） 流动相B：0.01%十二烷基硫酸钠溶液 流速：每分钟1mL； 检测波长：254nm。 对照品溶液的制备 取头孢他啶对照品适量，精密称定，加水制成含头孢他啶100?g/1mL的溶液，摇匀。 测定法 取本品适量，精密称定，加水制成含头孢他啶20mg/1mL的溶液，立即进样200?L，以流动相A为流动相进行测定，记录色谱图；另取对照品溶液200?L注入液相色谱仪，以流动相B为流动相，记录色谱图，按外标法计算，本品含头孢他啶聚合物以头孢他啶计不得过0.3%。 1、聚合物——HPLC法 例：ChP2005中头孢他啶聚合物的检查： ?-内酰胺类抗生素检查聚合物的药物见教材表11-1 2、有关物质和异构体 β-内酰胺类抗生素中的有关物质和异构体常采用色谱法检查。 例1： 头孢呋辛酯中有关物质和异构体的检查用HPLC法检查 例2：头孢氨苄中有关物质检查 ?-内酰胺类抗生素检查有关物质和异构体的药物见教材表11-1 (见教材) 取本品，加水制成每1mL中含1.80mg的溶液，照分光光度法，在280nm的波长处测定吸收度，不得大于0.10；在264nm的波长处有最大吸收，吸光度应为0.80～0.88。 用来控制青霉素钠（钾）的含量 用来控制杂质的量 3、吸光度 例：ChP2005中青霉素钠（钾）的吸光度检查： 4、有机溶剂 一般用GC法检查，个别用HPLC法检查 少数样品用微生物检定法，大多采用理化测定法。 四、含量测定 中国药典中收载的本类药物，除磺苄西林钠采用微生物检定法外，其他均用HPLC法 此外，中国药典曾用过降解后剩余碘量法、电位配位滴定法、硫醇汞盐测定本类药物的含量 HPLC法是β-内酰胺类抗生素含量测定的最主要方法。近年来发展快速，能有效分离供试品中可能存在的降解产物、未除尽的原料及中间体等杂质，并能准确定量，对本类药物的原料药、制剂、生物样本均能测定。 本类药物的HPLC法通常采用反相HPLC，以外标法计算含量 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：ODS柱 流动相：缓冲液[取磷酸二氢钾14g和40%氢氧化四丁基胺溶液6.5g 溶解于约 70ml水中，用1mol/L氢氧化钾溶液调节pH至7.0，用水稀释至1000ml，混匀]-水-乙腈（52：23：25）并用1mol/L氢氧化钾溶液或10%稀磷酸溶液调节pH至7.5±0.05 检测波长：235nm。 取青霉素V钾对照品适量，用流动相溶解并稀释成每1ml中含青霉素V钾2.4mg的溶液，将此溶液与对照品溶液以1：3体积比混合，进样测定，青霉素和青霉素V的分离度应不小于2.0。　　 例：注射用普鲁卡因青霉素的含量测定 测定法 供试品溶液：取装量差异项下的内容物，精密称取适量，配成1.4mg/ml(流动相溶解并稀释) 对照品溶液(1)：青霉素对照品溶液：含青霉素0.8mg/ml，流动相溶解并稀释。 对照品溶液(2)： 盐酸普鲁卡因对照品溶液：含普鲁卡因0.54mg/ml，流动相溶解并稀释。 各精密量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。 计算： 按外标法以峰面积计算供试品中C13H20N2O2(普鲁卡因)和C16H18N2O4S(青霉素)的含量：每1mg的C16H18N2O4S相当于1780青霉素单位。 规定：按无水物计算，含青霉素应为59.0%～66.3%，含普鲁卡因应为29.1%~35.6%，每1mg 含青霉素应为1050~1180单位，按平均装量计算，含青霉素应为标示量(40万单位 或80万单位 )的95.0％～105.0％。 对于青霉素： CX/C对=AX/A对 ? CX=(AX/A对)?C对 青%=(CX/C配) ?100% 对于普鲁卡因： CX/C对=AX/A对 ? CX=(AX/A对)?C对 普%=(CX/C配) ?100% 按平均装量算，每瓶含纯品青霉素：W平均?青% 每1mg的C16H18N2O4S (青霉素)相当于1780青霉素单位，故每瓶的纯品青霉素为W平均?青% ?1780单位 标%=(W平均?青% ?1780)/标示量 ?100% 2、碘量法 利用青霉素或头孢菌素分子不消耗碘，而其水解产物消耗碘的性质，采用剩余碘量法测定，以标准对照法计算含量。 以青霉素为例： 反应分两步： 第一步：青霉素在碱性条件下水解，该步反应是按化学计量进行的 第二步：水解生成的青霉噻唑酸在酸性条件下与定量过量的碘作用，剩余的碘用硫代硫酸钠滴定 同时做空白试验以消除杂质的影响，并用青霉素标准品进行平行对照测定以消除