(茶叶籽油中茶多酚的分光光度法测定方法.docVIP

茶叶籽油中茶多酚的分光光度法测定方法 一、鉴别试验 1. 试剂：1克香荚兰素溶于100ml盐酸中，用时现配。 2. 鉴别方法： 取10ml样品溶液（4%）放蒸发皿中蒸干，然后滴加香荚兰盐酸溶液生成樱桃红色。这是儿茶素类化合物的特异显色剂，不受花色素和黄酮甙的干扰，具专属性，缺儿茶素的样品呈阴性。 二、含量测定 1. 原理：多酚类物质能与亚铁离子生成蓝紫色络合物。用分光光度法测定其含量。 2. 试剂 2.1 酒石酸铁溶液：称硫酸亚铁（FeSO4.7H2O）1g酒石酸钾钠（KNaC4 H4O6.4H2O）5g加水溶解并定容至1L，此液可稳定10天。 2.2 pH7.5的索伦逊缓冲液（先配制以下两种溶液） a、1/15 M的磷酸氢二钠溶液：称取Na2HPO4.12H O23.877g，加水溶解并稀释至1L。 b、1/15M的磷酸二氢钾溶液：称取经110℃烘干2h的KH2PO49.078g，加水溶解至1L。 取溶液a 85ml和溶液b 15ml混匀，即得pH7.5的缓冲液。 2.3 茶多酚标准溶液 秤取茶多酚标准0.2000g，加溶解并稀释至100.0mL。 3. 测定方法 3.1 茶多酚标准曲线制备：分别吸取茶多酚标准溶液（2mg/ml）：0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml分别盛放25.0ml的比色管中，加水1.0ml，再加4.0ml水，然后加5.0ml酒石酸铁溶液，加PH7.5缓冲液至刻度，摇匀，放540nm比色。 4. 样品测定：称取一定量样品（约1g），用水溶解至25.0mL，经过滤，弃去初滤液，吸取0.5ml滤液放25ml的比色管中，加0.5ml水，再加4.0ml水，然后加5.0ml酒石酸铁溶液，然后用PH7.5缓冲液稀释至刻度。与标准管同时比色测定。 4. 计算： X=shy;C×V1 /V2/m×100/1000 式中 X：样品中茶多酚含量g/100g； V1：样品溶液总体积mL； V2：测定用样品溶液体积mL； m：样品质量g。 茶叶籽油中茶多酚的茶多酚含量的测定、原理产品中多酚类物质能与亚铁离子形成紫蓝色络合物。用分光光度法测定其含量。、仪器和用具实验室常规仪器及下列各项。1、分析天平：感量0.0001g2、容量瓶：100ml3、分光光度仪、试剂和溶液所用试剂应为分析纯（AR），水为蒸馏水。1、酒石酸亚铁溶液：称取1g（准确至0.0001g）硫酸亚铁和5g（准确至0.0001g）酒石酸钾钠，用水溶解并定容至1000ml（溶液应避光，低温保存，有效期一个月）。2、PH7.5磷酸盐缓冲液：1）1/15M磷酸氢钠：称取23.377g磷酸氢二钠，加水溶解后定容至1000ml。2）1/15M磷酸二氢钾：称取9.078g磷酸二氢钾，加水溶解后定容至1000ml。取上述1/15M的磷酸氢二钠溶液85ml和1/15M的磷酸二氢钾溶液15ml混合均匀。、测定步骤1、试液的制备用小烧杯称取0.1g（准确至0.0001g）试样，溶解移入100ml容量瓶中，并用蒸馏水稀释至刻度。2、测定准确吸取上述试液1ml，注入25ml容量瓶中，加水4ml和酒石酸亚铁溶液5ml，充分混匀。再加PH7.5的缓冲液至刻度，用10mm比色皿，在波长540nm处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度（A）。、结果计算茶多酚（％）＝(A1.957×2/100) ×［L1/(L2×M×m)］×100 式中 L1：试液的总量（mL） L2：测定时的用液量（mL） M：试样的质量（g） m：试样干物质含量百分率（%） A：试样的吸光度 1.957：用10mm比色杯，当吸光度等于0.50时，每毫升茶汤中含茶多酚相当于1.957mg。 六、5、2）的要求，则取两次测定的算术平均值作为结果。 2、重复性 同一样品的两次测定值之差，每100g试样不得超过0.5g