选修3.1.1DNA重组技术的基本工具(上课用)剖析.ppt

想一想 1．限制性核酸内切酶的作用特点体现了酶的哪种特性？ 【提示】　限制性核酸内切酶只能识别特定的核苷酸序列，并且只能在特定部位切割，这说明了酶具有专一性。 2.限制性核酸内切酶与DNA解旋酶的不同？ 两者作用部位不同，前者作用于磷酸与脱氧核糖之间的磷酸二酯键，而后者作用于两个碱基之间的氢键。 3.原核生物体内限制酶的作用？限制酶不切割自身DNA的原因是？ 切割侵入的外源DNA，使之失效，从而达到保护自身的目的 原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰 学案例1 基因的针线：DNA连接酶 G A A T T C C T T A A G G A A T T C C T T A A G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G 用同种限制酶切割 把切下来的DNA片段拼接成新的DNA，即将脱氧核糖和磷酸连接起来催化形成磷酸二酯键 DNA连接酶的作用 DNA连接酶——“分子缝合针” 1..种类 大肠杆菌 黏性 T4噬菌体 平 2.作用：将切下的DNA片段“缝合”，恢复被限制酶切开的___________，拼接成新的DNA分子。 磷酸二酯键 阅读课本第5页“分子缝合针”——DNA连接酶的相关内容，完成下列问题 两DNA片段要具有互补的黏性末端才能拼起来 DNA连接酶的缝合作用 可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来， 注意：DNA连接酶可连接双链DNA中的DNA单链缺口，但不能连接单链DNA！ DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？ T4 DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低 DNA连接酶的缝合作用 DNA连接酶与DNA聚合酶的比较 ? DNA连接酶 DNA聚合酶 相同点 化学本质 都是催化两个脱氧核苷酸之间形成 键 作用实质 不同点 是否需要模板 链 链 连接DNA单/双链 在 之间形成磷酸二酯键 将 通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链 作用过程 将两个DNA片段连接成重组DNA分子 合成DNA分子的一条链 作用结果 用途 基因工程 DNA复制 磷酸二酯 不需要 需要 双 单 两个DNA片段 单个脱氧核苷酸 都是蛋白质 A A T T G C A A T T A A T T DNA聚合酶 DNA聚合酶 DNA聚合酶 DNA聚合酶 DNA聚合酶 DNA聚合酶的作用 返回 DNA连接酶 DNA聚合酶 相同点 作用实质 化学本质 不 同 点 模板 作用对象 作用结果 用途 都能催化形成磷酸二酯键 都是蛋白质 不需要 需要 形成重组DNA分子 形成DNA的一条链 基因工程 DNA复制 DNA连接酶与DNA聚合酶的比较 只能将单个核苷酸连接到已有的DNA片段上，形成磷酸二酯键 在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 【探规寻律】　几种酶的作用部位 限制性核酸内切酶、DNA连接酶、DNA聚合酶作用于①部位,DNA解旋酶作用于②部位。 学案例2 三、分子运输车——基因进入受体细胞的载体 　　 要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物体内进行表达，首先得将这个基因送到乙生物的细胞内去！能将外源基因送入受体细胞的工具就是载体。 基因工程的载体被喻为： 分子运输车 载体的作用 载体的必要条件 载体的种类 阅读课本第6页“分子运输车”——运载体的相关内容，填写下表 自主学习 1）能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。 2）具多个限制酶切点，以便与外源基因连接。 3）具有某些标记基因，便于进行鉴定和选择。 4）必须是安全的 ，对受体细胞无害。 5）载体DNA 分子应大小适中，以便于提取和操作 1）作为运载工具，将目的基因导入受体细胞中 2）在受体细胞内对目的基因进行大量复制 ①细菌的质粒 ②病毒：λ噬菌体衍生物、动植物病毒等。 有标记基因的存在，可用含青霉素的培养基鉴别。 有切割位点 能复制并带着插入的目的基因一起复制 质粒——裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的很小的双链环状DNA分子。 最常用运载体——质粒 实际上在基因工程操作中，真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。 作为载体的必要条件 1.能在受体细胞中复制并稳定保存 2.有一个至多个限制酶切位点，供外源DNA片段