第二章细胞生物学研究方法预案.ppt

Caenorhabditis elegans Drosophila melanogaster Arabidopsis thaliana 拟南芥菜 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * Hela细胞（左）、CHO细胞（右）的培养 小鼠皮肤成纤维细胞 Hela细胞 （二）植物细胞培养 类型： 原生质体培养 （体细胞培养） 单倍体细胞培养（花药培养） （三）非细胞体系：指来源于细胞，但已不具备 完整的细胞结构，而包含有进行正常生物学反应所 需物质组成的体系。主要用于研究DNA复制、RNA 转录、蛋白质合成、高尔基体的膜泡运输机制以及 细胞核装配（包括染色质装配、核膜装配及核骨架 的装配）等方面的问题。 Plant Cell Culture Animal Cell Culture 二、细胞工程 细胞工程是在细胞水平上有计划的保存、改变和创造细胞遗传物质，以产生新的物种和品系，或大规模培养组织细胞以获得生物产品。 （一）细胞融合与细胞杂交技术 1.细胞融合：是指将两个或两个以上的细胞合并成一个细胞的过程。 2.方法 病毒介导法 聚乙二醇介导法 电脉冲介导法 病毒介导的细胞融合 3.细胞融合的基本过程 ①细胞在诱融剂或电场作用下凝集并彼此靠近。 ②两相邻细胞的质膜相互融合。 ③亲本细胞质膜上的受体、糖蛋白、糖脂等成分重新分布。 ④细胞质发生融合。 ⑤细胞核融合，形成单核融合细胞。 4.几个相关概念 同核融合细胞：基因型相同的细胞形成的融合细胞。 异核融合细胞：基因型不同的细胞形成的融合细胞。 自发融合：同种细胞在培养过程中自发合并的现象，如肌纤维。 诱发融合：异种间的细胞必须经诱导剂处理才能融合 The production of hybrid cells. （二）单克隆抗体技术 B淋巴细胞在抗原的刺激下增殖分化转变成浆细胞产 生抗体，每一个B淋巴细胞只能接受单一的抗原刺激 产生特异性抗体，即单克隆抗体。但B淋巴细胞不易 在体外存活。 瘤细胞可以在体外培养生存并无限增殖，但不分泌特 异抗体。将小鼠骨髓瘤细胞与分泌某种抗体的B淋巴 细胞融合，融合细胞既具有肿瘤细胞无限增殖的特性 又具有B淋巴细胞分泌特异抗体的能力，融合细胞称 为杂交瘤细胞。 Preparation of hybridomas that secrete monoclonal antibodies against a particular antigen (X). The selective growth medium used contains an inhibitor (aminopterin) that blocks the normal biosynthetic pathways by which nucleotides are made. The cells must therefore use a bypass pathway to synthesize their nucleic acids, and this pathway is defective in the mutant cell line to which the normal B lymphocytes are fused. Because neither cell type used for the initial fusion can grow on its own, only the hybrid cells survive. 7. Monoclonal Antibodies （三）显微操作技术 在倒置显微镜下利用显微操作器进行细胞或早期胚胎操作的一种方法。 包括细胞核移植、显微注射、嵌合体技术、胚胎移植以及显微切割等。 细胞核移植技术已有几十年的历史，1952 年，Briggs和King等将不同阶段的蛙胚细胞核注入去核的蛙卵，构建核移植胚。Gordon（1962）证明原肠胚以后的细胞核移植能发育到成体。1997年，Wilmut等克隆了绵羊Dolly。 显微操作仪 转基因显微操作过程 第四节 分子细胞生物学技术 一、原位杂交技术 DNA变性：当溶液中的DNA分子处于高温或高 pH(13)条件下，双螺旋的碱基互补被破坏， DNA双连解离成两条单链的过程。 DNA复性：当温度降低至合适温度或恢复pH值 到中性，两条裂解的单链按碱基互补配对原则 重新形成双链结构的过程。 核酸分子杂交：按照碱基互补配对原则， 将不同来源的序列互补单链DNA\DNA、 RNA\RNA、R