液质联用技术在药物杂质结构分析中的应用..docVIP

液质联用技术在药物杂质结构分析中的应用 　　　　　　　　――吡格列酮杂质结构分析 (雍 春310011) [摘要] 目的：要求对吡格列酮4.800min杂质-A（相对保留时间为RRT=0.55）和7.550min（相对保留时间为RRT=0.87）杂质-B进行研究，确定其结构。方法：通过对杂质的提取提高杂质的含量，通过液质联用技术对杂质进行结构分析。结果：成功地确认了多个研究杂质的结构。 关键词： 杂质 提取 液质联用技术 结构分析 在药物质量研究中，有机杂质的研究成为制约药物深入研究的重点及难点。随着液质联用技术的广泛应用，液质联用技术越来越成为药物杂质结构研究的有力手段。本文通过对杂质一系列的有效提取，提高了杂质的含量，同时提高了其在质谱多级裂解中的响应，并通过液质联用技术成功地确认了多个研究杂质的结构。 杂质研究目的要求 要求对吡格列酮4.800min杂质-A（相对保留时间为RRT=0.55）和7.550min（相对保留时间为RRT=0.87）杂质-B进行研究，确定其结构。（附 图 1） 仪器及试药 仪器：Agilent1100高效液相色谱仪，质谱仪，旋转蒸发仪 试药：乙醇（分析纯），正己烷（分析纯），正丁醇（分析纯），醋酸（分析纯），乙腈（色谱纯），氨水（分析纯），水（重蒸水）。 杂质的提取 吡格列酮氢化母液（附 图2） 吡格列酮 滤液（含4.6min杂质A约3.6%） 二氧六环 母液样品 下层液 杂质-D提取液 正己烷层（上层）含6.9min杂质-D可高达54%（附 图3） 稠状物 上层为有色层（有机层） 收集下层水层 杂质-A提取液 4.6min杂质-A含量可达约30%。（附 图4） 杂质的结构分析 分析色谱条件1： 色谱柱：依利特Hypersil ODS2 250×4.6mm 5μm 流动相：乙腈-水-醋酸=500：500：1.2（用氨试液调节pH6.0） 分析色谱条件2： 色谱柱：依利特Hypersil ODS2 250×4.6mm 5μm 流动相：乙腈-水-醋酸=420：580：0.9（用氨试液调节pH6.2） LC-MS分析色谱柱均为依利特Hypersil ODS2 250×4.6mm 5μm 峰位的确认及分子量初步分析(LC-MS分析)：取吡格列酮样品分别于色谱条件1 和色谱条件2下进样分析，并取吡格列酮样品于色谱条件2下进行LC-MS分析。结果见下表1。 表1 杂质的出峰位置的确认及分子量初步分析(LC-MS分析) 色谱条件 成分 保留时间(RT) 相对保留时间(RRT) 分子量 色谱条件1 (附图5) 杂质A 4.669min 0.57 / 杂质B 7.177 min 0.88 / 色谱条件2 (附图6) 杂质A 6.734min 0.45 / 杂质B 12.432min 0.84 / 色谱条件2 LC-MS (图7) 杂质A 6.296min 0.45 298 杂质B 11.563 min 0.83 326 母液的LC-MS分析：取吡格列酮母液于色谱条件1下进行色谱分析，在梯度条件下进行LC-MS分析，结果见下表2。 表2 母液的色谱分析和LC-MS分析 色谱条件 成分 保留时间(RT) 相对保留时间(RRT) 分子量 色谱条件1 (附图2) 杂质A 4.694min 0.56 / 杂质B 7.276min 0.87 杂质D 7.507min 0.90 LC-MS分析 （梯度洗脱） (附图8) 杂质A 7.186min 0.56 298 杂质B 13.143min 1.03 326 杂质E 8.283min 0.65 257 杂质D 11.677 min 0.91 135 由于LC-MS色谱系统的变化(如调节流动相pH误差较大)会使出峰时间顺序发生变化，这在吡格列酮分析方法学研究中得到证实，所以LC-MS中分子量为326保留时间为13.143 min的杂质应为图2中7.276 min杂质B。 样品及杂质LC-MS/MS分析： 对吡格列酮050602批样品的分析：取吡格列酮050602批样品于色谱条件1下进行液相色谱分析，并进行LC-MS/MS分析，结果见下表3。 表3 吡格列酮050602批样品的色谱分析和LC-MS/MS分析 色谱