电泳技术常用电泳仪.pptVIP

垂直板电泳槽和电源 第五节 毛细管电泳 （二）毛细管凝胶电泳 毛细管凝胶电泳(CGE) 常用聚丙烯酰胺在毛细管内交联制成凝胶柱，依据分离支撑物的分离作用不同，CGE又分为非变性CGE和变性CGE，前者以分子筛、电荷／质量比的作用进行分离；后者则以质量、分子筛的作用进行分离。 适用于分离、测定肽类、蛋白质、DNA类物质的分离。 第五节 毛细管电泳 （三）毛细管胶束电动色谱(MECC) MECC系统中存在两个相：流动的水相和起到固定相作用的胶束相。 在含有胶束的流动相中，溶质在“水相”和“胶束相”(准固定相)之间进行分配，即使是中性溶质，因其本身疏水性不同，在二者之间的分配也会有差异，疏水性强的溶质在“胶束相”中停留时间长，迁移速度就慢。反之，亲水性强的溶质迁移速度就快，最终中性溶质将依其疏水性不同而得以分离。 第五节 毛细管电泳 毛细管胶束电动色谱原理图 第五节 毛细管电泳 （四）毛细管等电聚焦电泳 不同等电点的分子分别聚集在不同的位置上，不作迁移而彼此分离，这就是等电聚焦分离过程。毛细管的等电聚焦是在毛细管内实现的等电聚焦过程，具有极高的分辨率，通常可以分离等电点差异小于 0.01pH单位的两种蛋白质，例如肽类、蛋白质的分离。 第五节 毛细管电泳 （五）毛细管等速电泳 毛细管内首先导入具有比被分离各组分高电泳淌度的前导电解质，然后进样，随后再导入比各分离组份低电泳淌度的尾随电解质，在强电场的作用下，各被分离组分在前导电解质与尾随电解质之间的空隙中发生分离。 第五节 毛细管电泳 （六）毛细管电色谱 它包含了电泳和色谱两种机制，是在毛细管中填充 或在毛细管壁 上键合（或涂壁）固 定相，从而构成毛细 管色谱柱，依靠电渗 流推动流动相，携带 样品迁移，根据样品 分子的质荷比、分子 尺寸及分配系数的差 别而分离。 CEC-加压毛细管电色谱仪 第五节 毛细管电泳 （七）毛细管电泳芯片 毛细管电泳芯片是在常规毛细管电泳的原理和技术基础上，利用微加工技术在平方厘米级大小的芯片上加工出各种微细结构，如通道和其它功能单元，通过不同的通道、反应器、检测单元等的设计和布局，实现样品的进样、反应、分离和检测，是一种多功能化的快速、高效和低耗的微型实验装置。 第五节 毛细管电泳 四、毛细管电泳仪的基本结构 毛细管电泳仪的结构并不复杂，主要有高压毛细管柱、检测器，以及两个 供毛细管两端插入而又可和电 源相连的缓冲液槽。 （一）毛细管柱 （二）检测器 （三）毛细管电泳 法的进样技术 毛细管电泳仪 第六节 电泳仪的维护保养及故障排除 一、电泳仪的维护保养 （一）每日维护 （二）每周维护 （三）每月维护 （四）按需进行的维护 TriSep 毛细管电泳仪 第六节 电泳仪的维护保养及故障排除 二、电泳仪的故障排除 电泳仪是精密仪器，在操作过程中要严格遵守操作规程，但不可避免会出现各种各样的故障，当仪器提示有故障时，应立即处理。 BECKMAN COULTER毛细管电泳仪 第六节 电泳仪的维护保养及故障排除 故障信息 引起故障可能原因 解决方法 转盘识别错误 细微灰尘吸附在灯上 仪器关机，用洁净棉签轻轻拭去灯上面的灰尘。仪器开机后再进行测定。 样品识别错误 血清分离不好或者有灰尘吸附 关机状态，拆开仪器内透明有机玻璃，用无水乙醇擦拭加样针外壁，然后安装好，再用仪器内程序进行加样针清洗，洗完 1～2 次后，进行加样针加样感应定位。 仪器报警出现缺少稀释杯或稀释杯感应错误 仪器稀释杯位置错误 观察稀释杯位置，如果没有处于正常位置，可手动将其移动到其原来位置， 然后进行稀释杯感应定标。 曲线不理想，显示不稳定 毛细管的长期使用出现不清洁 毛细管清洗程序进行清洗，然后按激活程序进行激活既可 电泳时出现峰丢失 未接入检测器，或检测器不起作用，进样温度太低，柱箱温度太低，无载气流 检查设定值。 检查温度，并根据需要调整。检查温度，并根据需要调整。检查压力调节器，并检查泄漏，验证柱进品流速。 运行过程中突然断电 电流量不稳定或仪器内有短路现象 采用稳压措施，咨询工程师更换保险 毛细管电泳仪常见故障及故障排除方法 第七节 电泳仪的临床应用 一、 血清蛋白电泳 新鲜血清经醋酸纤维薄膜或琼脂糖电泳、染色后，通常可见5条带，即清蛋白、?1、