周倩雯茶槲寄生“螃蟹脚”中黄烷醇及黄酮醇化合物的HPLC分析全解.ppt

主要内容 1 研究背景 研究背景 近年来，对槲寄生属的研究发展较快，已有研究表明，槲寄生属植物的主要功能成分为黄酮类化合物等一些高分子化合物。茶槲寄生“螃蟹脚”由于主要寄生在古茶树上，一直以来都很少得到人类的认识和利用。 2 研究目的 3 研究材料与方法 3.1 实验材料 ：螃蟹脚 标准品： 1）黄酮类标准样：杨梅素标准样，槲皮素标准样（纯度96.5% ）、山柰酚标准样（纯度95.9%） 2）儿茶素标准样：表没食子儿茶素（EGC，纯度 99.8%），表儿茶素（EC，纯度99.8%），表没 食子儿茶素没食子酸酯（EGCG,纯度98%），表 儿茶素没食子酸酯（ECG，纯度，98.9%） 3）试剂：甲醇为色谱纯，水为超纯水，磷酸为分析纯。 3.2 HPLC分析装置和色谱条件 分析装置：美国安捷伦1200型高速液相色谱系统。 色谱条件 1）黄酮醇类物质的HPLC分析条件 流动相：A相：0.2%磷酸水溶液；B相：80%甲醇。梯度从30%B到80%B，流速0.8 mL/min，55 min内完成，检出波长360 nm，柱温40℃，进样量10 μL，每次完成后系统平衡10 min后再次进样。 2）黄烷醇类物质的HPLC分析条件 流动相：A相：（0.05MH3PO4-H2O）-5%CH3CN；B相：(0.05MH3PO4-H2O)-80%CH3CN；梯度从9%B到53%B，流速0.7ml/min,55min内完成，检出波长280nm，进样量2.0μl 每次完成后系统平衡15min后再次进样。 3.3 标品溶液的配制 1）黄烷醇类物质混合标准液的制备 分别称取4种主要儿茶素标准样5.0mg于50ml棕色容量瓶中加入50ml 70%甲醇溶液溶解混匀，作为混合标准样溶液保存备用。 2）黄酮醇类物质标准液的制备 分别精密称取杨梅素、槲皮素和山柰酚对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液。 3.5 茶多酚总含量测定 ——酒石酸铁法 4 研究结果与分析 黄烷醇分析结果 除了刚才的的分析结果外，通过酒石酸铁比色法所测得的“螃蟹脚”中多酚类物质的总含量仅为0.84%（8.4mg/g），含量远低于茶叶中多酚类物质的含量。 5 结论 螃蟹脚黄烷醇类的组分与茶叶中组分具有明显的差异，其茶多酚总含量远低于茶叶中茶多酚总含量，为0.84%，即8.4mg/g； 检测到了包括杨梅素、槲皮素、山柰酚和6个未知组分在内的9个黄酮醇组分，结果计算出总黄酮醇苷含量为5.83mg/g； 致谢 首先，要特别感谢我的导师李家华老师的指导与督促，从选题到成文，李家华老师都提出了许多宝贵的意见，并在繁忙的工作中抽出时间仔细审阅了全文。同时，赵明老师在实验过程中也提供了很多的帮助。在此，衷心感谢两位老师。 其次，还要感谢在本次实验过程中一起努力所有小组成员，没有你们的帮助，实验也不会顺利的完成。 * * * 茶槲寄生“螃蟹脚”中黄烷醇及黄酮醇化合物的HPLC分析 导师：李家华 博士 答辩人：周倩雯 2012年5月15日 研究材料与方法 研究背景 研究目的 研究结果与分析 1 2 3 4 5 结论 茶槲寄生“螃蟹脚”系桑寄生科槲寄生属植物， 是一种寄生在树龄较老的古乔木茶树上的寄生植物，形状像小珊瑚，因寄生枝杆节状带毫，故此被称为“螃蟹脚”。据《中华人民共和国药典》记载，槲寄生作为我国传统中药，以干燥的带叶茎枝入药，其性凉，有祛风除湿、强筋壮骨等功效 。 本文采用HPLC法对“螃蟹脚”的多酚 类化合物中的黄烷醇及黄酮醇类物质的组 成及其含量进行了检测，为以后对其单体 成分的提取、药理作用及分子生物学等方 面的研究提供参考。 采自云南省普洱市澜沧拉祜族自治县的景迈万亩古茶园的古茶树上，样品经日光晒干后置于冰箱保存 。 加2%磷酸10ml 加10ml甲醇后充分摇匀 ，静置1小时 过滤，离心后取上清液 50mg“螃蟹脚”样品粉末 0.45μm微孔滤膜过滤 黄烷醇类物质HPLC分析用 “螃蟹脚”样品供试溶液的制备 黄酮醇类物质HPLC分析用“螃蟹脚”样品供试溶液的制备 “螃蟹脚”粉末1.00 g 加甲醇40 mL 盐酸 4 mL 回流水解1.5 h（85℃） 过滤 加甲醇定容至50 mL 0.45μm微孔滤膜过滤 3.4 供试品溶液的制备 加沸水450ml 沸水浴45min (每10min