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* * 不同生长时期方竹笋的解剖 作者：孟坤 导师：林树燕 前言 材料与方法 结果与分析 讨论 前言 1）在研究出方竹笋的结构与功能的同时，能够熟悉石蜡切 片技术的操作原理以及过程、运用。 2）主要利用解剖学的手段研究方竹笋部发育的机理。 3）方竹作为重要的观赏竹种之一，越来越受到人们的关注， 目前人们对方竹秆节的发育其产生机理知之甚少，因此本研 究科填补此项空白。 材料与方法 实验材料 方竹笋（采自南京林业大学后山竹园） 试剂 FAA固定液，1%番红，1%固绿，各级浓度酒精（70% 、80%、90%、95%、100%），二甲苯，石蜡，明胶粘 片剂，树胶。 实验方法 (1)取材、固定 取方竹笋一小段，采用70%固定液固定，也可以长期保存。 (2)脱水、透明 脱水： 依次使用70%、85%、95%、100%各级乙醇溶液脱水各40-60min 70%酒精——清洗，每次10min，共3次。 80%酒精——脱水，1h。 90%酒精——脱水，1h。 95%酒精——脱水，每次30min，共2次。 100%酒精——脱水，每次1h，共2次。 透明： 3/4纯酒精+1/4二甲苯——透明过度，1h。 1/2纯酒精+1/2二甲苯——透明过度，1h。 1/4纯酒精+3/4二甲苯——透明过度，1h。 纯二甲苯——每次1h，共2h。 材料与方法 实验方法： (3)浸蜡、包埋 自制饱和液体石蜡(37℃)，一般需要提前 2h准备，需保存于37℃环境中。将气生根用3-5mL自制饱和液体石蜡中，37 ℃恒温箱过夜。第2天将恒温箱升温至60℃。 倒出液体石蜡，使用二甲苯：石蜡=1：1 浸蜡，2h。 二甲苯：石蜡=1：2，2h。 纯蜡，每次2h，共两次。 (4)切片、贴片与烤片 包埋好的蜡块用刀片修成规整的四棱台，以少许热蜡液将其底部迅速贴附 于小木块上，夹在轮转式切片机的蜡块钳内，使蜡块切面与切片刀刃平行， 旋紧。通常切片厚度为8～10微米，切出一片接一片的蜡带，用镊子和针头 轻托轻放在纸上。将载玻片编号后，滴少许的粘片剂在其上，并用小拇指侧 腹快速均匀涂抹，滴两三滴展片剂于载玻片上，再把蜡片放入展片剂上，放 到恒温箱上，使蜡片铺展，等到载玻片没有多余水分的时候，将其放入45℃ 恒温箱中干燥，时间为三四天。 材料与方法 实验方法： (5)脱蜡复水及染色 脱蜡：甲苯2次，每次20min。 二重染色： 1：1二甲苯：乙醇，20min。 100%乙醇，5 min；100%乙醇，5min；95%乙醇，5min；85%乙醇，5min； 70%乙醇，5min。 1%番红，过夜（不少于18小时）。 70%乙醇，3min；70%乙醇，3min；85%乙醇，3min；95%乙醇，3min；95% 乙醇，3min。 0.5%固绿，8~10s。 95%乙醇，4min；100%乙醇，4min；100%乙醇，4min。 (6)透明和封片 1:1二甲苯:乙醇，4min；二甲苯，10min；二甲苯，10min。之后切片便会透明。 从二甲苯中取出染好色的片子，用中性树胶进行封片，滴加适量（1～2滴）中性 树胶，再将洁净盖玻片倾斜放下，以免出现气泡。 结果与分析 早期的原形成层最先分化出韧 皮部，渐次分化出木质部的导管分 子。在同一横切面，靠近髓部位的 原形成层最先分化出导管分子，形 成结构渐趋完善的维管束。在局部的扇形横切面上，同一层维管束排列呈规则 的圆弧状，各维管束间的基本组织内，零星分布着细胞质染色较深、具有分生 细胞特点的薄壁细胞。 随着薄壁细胞数量的增多 及细胞体积的增大，维管束排 列由内而外逐渐出现变化，弧 状排列逐渐趋于不规则 。 维管束在发育阶段的排列 秆芽发生于结部近表皮部位。秆环 分化初期即同时发生了秆芽的分化。从 染色上可以看到，秆芽发生部位的细胞 ，细胞质染色较深，为秆芽的原始细胞 。随着秆芽原始细胞的进一步分化，形 成向外凸出的幼芽。幼芽与秆相连部位 的细胞染色较浅，可观察到零星分布的 原形成层，幼芽前端可观察到染色较深 的细胞团，为幼芽的“活动中心”。至第 三时期，在横切面上已可观赏到两个并 列的秆芽，在主芽与秆的连接部位已可 观察到由秆部向秆芽内延伸的横向的原 形成束。至第五时期，在主芽两侧已可 观察到侧芽。主芽内髓分生组织分化明 显，中心的细胞染色较浅。秆芽及侧芽 均由芽鳞包被。芽鳞内已分化出原形成 层。 秆芽发育的过程 韧皮部结的出现 第五时期，幼笋内开始出现 韧皮部结，外