F41细胞工程程序.ppt

2．植物组织培养 (1)理论基础：植物细胞的全能性 易 错 警 示 易 错 警 示 转基因细胞 杂种细胞 茎尖、根尖等分生区 花药（花粉） 外植体 脱分化 愈伤组织 再分化 丛芽或胚状体 工厂化 生产药物 人工种子 转基因植物 杂种植物 作物脱毒 单倍体育种 微型繁殖 植物体 诱变处理 突变细胞 总结: 植物细胞工程的实际应用 突变体的利用 + 人工薄膜 培养 考点二 动物细胞培养与体细胞克隆 动物组织 单个细胞 细胞悬液 贴壁生长 分瓶培养 10代细胞 50代细胞 不死细胞 原代培养 传代培养 胰蛋白酶 剪碎 加培养液 接触抑制 少数 过程 细胞株 细胞系 细胞发生突变 胰蛋白酶 动物细胞培养不能最终培养成生物体 部分细胞核型可能改变 动物细胞培养的过程如下所示： 原代培养：取材（动物组织） →细胞分散→初次培养 传代培养：培养的细胞→细胞分散→继续培养 进行传代培养的原因： 接触抑制 细胞癌变,失去接触抑制特性。 3．条件: 能否用胃蛋白酶代替胰蛋白酶？ ⑴无菌、无毒的环境 对培养液和培养用具进行无菌处理；在培养液中添加一定量的抗生素;定期更换培养液； ⑵营养 葡萄糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素等 动物血清、血浆 ⑶温度和pH 温度36.5±0.5度，pH7.2～7.4 ⑷气体环境 O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） O2是细胞代谢所必需的。 CO2维持培养液的pH。 提供细胞生长增殖所需的激素、生长因子或补充合成培养基所缺乏的营养物质等。 ⑴、生产生物制品 病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等； ⑶、用于检测有毒物质及毒性； ⑵、动物基因工程离不开动物细胞的培养； 4．应用: ⑷、培养正常或各种病变的细胞，用于生理、病理、 药理等方面的研究。 获得细胞 或细胞产物 细胞的全能性 细胞数目增多 一般为植物体 培养结果 快速繁殖、培育脱毒作物等 培养目的 葡萄糖、动物血清 促生长因子 蔗糖、植物激素 培养基特有成分 液体培养基 固体培养基 培养基性质 细胞增殖 原理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 植物细胞和动物细胞培养的比较 动物核移植 ⑴概念：是将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。（用核移植的方法得到的动物------克隆动物） 分类 胚胎细胞核移植 体细胞核移植 细胞分化程度低，恢复全能性容易； 细胞分化程度高，恢复全能性不容易 （ MⅡ卵母细胞） 减数第二次分裂中期 将供体细胞注入去核卵母细胞 核移植 胚胎移植 供体细胞培养 卵母细胞做受体细胞的原因： a．卵母细胞体积大，易操作； b．含有促进细胞核全能性的表达的营养物质和激素。 ⑵过程： 使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部来自有重要利用价值的动物提供的体细胞 供体细胞 （供核） 细胞培养 体细胞 卵巢卵母细胞 （MⅡ中期：供质） 去核 无核卵 母细胞 注入 细胞 融合 重组细胞 构建重组 胚胎 胚胎 移植 代孕 母体 生出与供体奶牛遗传基础相同的犊牛 归纳: 1.共分成两大阶段：核移植和胚胎移植 2.严格来说新个体有卵巢母细胞的细胞质所以有两个亲本的性状 克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞核，但核外还有少部分DNA（如线粒体DNA）来自受体卵母细胞。 细胞核移植 易 错 警 示 考点三 动物细胞融合与单克隆抗体的制备 BB 、B瘤 、瘤瘤 （B、瘤） （一选）特定的选择性培养基：筛选出杂交瘤细胞 获得产生相应抗体的B细胞 （二选）抗体检测：能产生所需抗体的杂交瘤细胞 √ 体外培养 小鼠腹腔内培养 杂交瘤细胞特点：既能产生特异性抗体，又能大量增殖。 2.过程： 过程： 抗原 小鼠 效应B细胞 骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞 细胞融合、筛选 多孔培养板单个　细胞培养，筛选 能产生特定抗体的细胞群 体外培养 体内培养 提取出单克隆抗体 两次筛选 一：筛选出杂交瘤细胞 二：筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞 获得B淋巴细胞前对小鼠的操作是： 注射特定抗原 其目的： 获得能产生相应抗体的B淋巴细胞 3.单克隆抗体的应用： 单克隆抗体的优点：特异性强、灵敏度高、并可大量制备 ①作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与特异性结合 优点：准确、高效、简易、快速 ②用于 运载药物：制成“生物导弹” 治疗疾病：主要用于癌症治疗 既不损伤正常细胞，又减少了用药剂量。 “生物导弹” ＝单克隆抗体＋药物 单抗导向，药物为弹头 治疗疾病和运载药物 主要用于治疗癌症治疗，单