Respifish革兰氏阴性菌试剂盒说明书-初稿..docxVIP

respifFish医院获得性肺炎革兰氏阴性菌检测试剂盒使用说明书（名字待定）【产品名称】通用名称：英文名称：respiFISH HAP Gram Panel【包装规格】鉴定试剂：72人份/盒【预期用途】用于医院获得性肺炎诊断。通过临床定性检测呼吸道分泌物中的12种革兰氏阴性菌：肠内细菌科,大肠杆菌,克雷伯氏肺炎杆菌产酸克雷伯菌粘质沙雷菌奇异变形菌普通变形杆菌绿脓假单胞菌不动杆菌属嗜麦芽寡养单胞菌流行性感冒嗜血杆菌卡他莫拉菌如果对检测有疑问或想进一步验证，则需要进行传代培养后再检测。【检验原理】含有荧光基团和猝灭基团的一段“U型”结构的DNA序列作为探针，“U型”结构使猝灭基团和荧光基团彼此靠近，从而屏蔽荧光基团荧光。当探针与待检测样本中的革兰氏阴性菌rRNA序列互补结合后，“U型”结构被打开，屏蔽作用消失，在荧光显微镜下观察，呈现特异的红、绿荧光，荧光强度和样本含有革兰氏阴性菌数量成正比。【主要组成成分】组份名称规格主要成分1Stop Solution（10X）50mlMgCl2，NaCl, 三羟甲基氨基甲烷.2Mounting Medium8ml商业机密3探针溶液EDTA，甲酰胺，Tris盐酸，NaCl，10% LDS，双蒸水。4Clearance Buffer【储存条件】再重溶解之前，所有成分被保存在15℃-25℃，避光，干燥。保存在冰箱里的重溶解和准备的试剂，用之前需要被放到15℃-25℃放置。【适用仪器】荧光显微镜，滤光镜套件A （蓝光激发）: 荧光染料ATTO550: 最大吸收波长为554nm, 最大发射光波长576nm.滤光镜套件B （绿光激发）: 荧光染料FAM: 最大吸收波长为494nm, 最大发射光波长520nm.加热板：操作温度是52+/-1°C。【样本要求】从咽喉部取样后用1X Clearance Buffer稀释，震荡30秒直至样本完全溶解。应在24小时内送检。【检验方法】样本收集和处理样本收集完成储存在冰箱里（2℃-8℃），之后应该尽快的进行检测，检测时间不应该超过24小时。从咽喉部取样后用1X Clearance Buffer稀释，震荡30秒直至样本完全溶解。吸取1ml稀释液加到2ml 反应管中。如果样本稀释后仍然有很大的黏性，再加入同体积的1X Clearance Buffer稀释，静置1分钟，然后震荡，立即用于检测。吸取10微升稀释液，加入载玻片孔中。溶液配制配制1X Stop Solution： 50ml的10X Stop Solution稀释于200ml双蒸水和250ml乙醇（≥ 96%），均匀混合，放置于密闭容器中，室温保存（15℃-25℃），重新溶解后有效期4个月。Clearance Buffer：50ml的10X Clearance Buffer稀释于450ml双蒸水，均匀混合，放置于密闭容器中，室温保存（15℃-25℃），重新溶解后有效期4个月。探针溶液：避光（2℃-8℃）.打开后保存4个月。准备两个酒精染色缸（≥ 96%），分别加100ml 酒精到两个干净的小型染色缸里，并用标签标明酒精浴1, 酒精浴2.准备一个Stop Solution染色缸，加1X Stop Solution 100ml到一个干净的小型染色缸里，，并用标签标明。注意事项更换Stop Solution，如果Stop Solution在染色缸中放置时间超过5天或者已经浸入过15张载玻片。不用的时候应当盖上染色缸的盖子。样本检测步骤固定标记样本病人的编号只能用铅笔标记载玻片样本用1X Clearance Buffer稀释，震荡30秒直至样本完全溶解。吸取1ml稀释液至2ml 反应管中。如果样本稀释后仍然有很大的黏性，再加入同体积的1X Clearance Buffer稀释，静置1分钟，然后震荡，立即用于检测。吸取10微升稀释液，滴加到用铅笔标记的载玻片孔里。放置载玻片到已经预热至52+/-1°C加热板上，干燥5分钟后从加热板上去下载玻片。注意避免过于干燥。细胞部分裂解加入10微升双蒸水至载玻片孔中。放置载玻片到已经预热至52+/-1°C加热板上，干燥5分钟后从加热板上去下载玻片，注意要使载玻片完全干燥。转移载玻片到酒精浴缸1中，浸泡5分钟。取出载玻片，竖置在一张干净的吸水纸上，吸去边缘水分。放置载玻片到已经预热至52+/-1°C加热板上，干燥20秒后从加热板上去下载玻片，注意要使载玻片完全干燥。杂交注意：探针中包含有甲酰胺从Cartridge中吸取10微升探针溶液，加入至载玻片每个孔中。（注意：Cartridge的管1，对应的加入到载玻片的孔1中）用杂交盖子盖住载玻片。转移到加热板杂交室里（52+/-1°C），孵育10分钟。停止把载玻片从生产配方和物料整理取出，移走杂交盖子，放置载玻片到Stop Solution