荔枝果肉氧化物酶提取与初步纯化.pptVIP

荔枝果肉过氧化物酶提取与初步纯化 蔡俊良 09食工（2） 20090802230 研究内容 该试验对荔枝果肉多酚氧化酶的提取和初步纯化进行研究，以便对果肉POD的性质作进一步研究，拟为解决荔枝深加工中酶促褐变问题提供理论。 POD活性测定方法 参照陈贻竹和王以柔的方法，并稍作修改。POD测定系统为3 mL，其中含2.4mL磷酸缓冲液(pH7．0) 、0．1 mL 1％过氧化氢、0．4mL 1％愈创木酚。加入0．1 mL酶液后启动反应，于波长470 nm和室温下记录2 min 内OD值的变化。一个酶单位(u)定义为在测定条件下每分钟引起的光密度改变0．001所需的酶量。 不同品种荔枝果肉过氧化物酶(POD)的活力  荔枝品种间酶活性差异显著，从47U/g·min~1428U/g·min之间。其中青荔的POD活力最高，玉荷包最低。 提取时间对POD酶活的影响 在提取时间10min的时间内，酶活仅为763 U／mL，随着提取时间的延长，POD酶活有所提高，当提取时间延长至30 rain时，酶活增加到l 177 U／mL。随着浸提时间的进一步的延长，POD酶活几乎保持不变。 提取液离子浓度对POD酶活的影响 随着离子浓度的逐步增加，提取液酶活不断增大；当提取液离子浓度增加到0.3mol/L时，提取液酶活达到最大值：而随着离子浓度的进一步增大，酶活则呈下降趋势。当提取液为蒸馏水（离子浓度为0）时，提取液酶活最低。一般情况提取酶活时应选用合适的缓冲液体系。 提取液pH值对POD酶活的影响 当提取液pH值分别为5和7的时候，提取酶活都达到峰值。由POD的酶学性质可知，pH值5是POD的最适反应pH。这可能是造成提取液pH为5时，提取酶活也比较大的原因之一。但由于POD在pH为5时，酶活稳定性不高，因此选用pH7为提取液最佳pH值。 提取液料液比对POD酶活的影响 随着料液比的不断增加，提取液酶活不断增大。 这主要是因为料液比不断增加时，POD酶充分溶出，酶活增大；另一方面，料液比的增大也使POD酶液稀释，酶活有所降低。当料液比为l：15(g：mL)时，酶活达到较大值，而随着料液比的继续增大，酶活变化差异不显著。 提取最佳条件 1)用丙酮粉法缓冲液提取过氧化物酶，POD酶活的最佳提取时间为30 min，当提取液离子浓度为0．3 mol／L，POD酶活最高；提取液的最佳提取pH为7；最适料液比为1：15(g：mL)。 2)在16个被测荔枝品种中，白糖罂的多酚氧化酶活力最强，为112 U／g·min，而玉荷包最弱，仅为 6U／g·min清荔的过氧化物酶活力最强，为1 542U／g·min，同样也是玉荷包的过氧化物酶活力最弱。 谢谢观看 * *