碱性成纤维细胞生长因子在前列腺癌和良性前列腺增生组织中表达的意义.docVIP

碱性成纤维细胞生长因子在前列腺癌和良性前列腺增生组织中表达的意义 作者：刘艳波　沈维高　赵雪俭 【摘要】 目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) 在前列腺癌和良性前列腺增生组织中表达的意义。方法　采用斑点杂交和免疫组化法测定50 例正常前列腺组织(正常对照组)、40 例良性前列腺肥大(BPH)组织和48 例前列腺癌组织中bFGF 的表达情况。结果 BPH和前列腺癌组织中bFGF的表达明显高于正常对照组(P＜001)。bFGF 表达升高的程度与BPH的分度、前列腺癌的病理分级和临床分期关系不显著。结论 bFGF 与前列腺癌和前列腺增生的发生发展过程有关。 【关键词】 前列腺增生；前列腺癌；碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) 　　前列腺癌和前列腺增生是老年男性常见疾病。近年来研究资料表明前列腺癌和前列腺增生组织中存在许多分子表达异常，但是对其发病机制尚缺乏统一的认识〔1,2〕。碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）是一种常见的内皮细胞分裂原，通过自分泌或旁分泌机制促进血管的生成、组织再生、抑制细胞凋亡及增强细胞侵袭能力等，与许多疾病的发生发展关系密切。研究结果显示bFGF在前列腺癌和前列腺增生的发病过程中也发挥重要的作用〔3～7〕。我们采用斑点杂交和免疫组化染色方法,观察了bFGF 在正常前列腺、良性前列腺增生(benign prostate hyperplasia，BPH)和前列腺癌组织中的表达及其与临床的关系,并探讨其临床意义。 　　1 材料与方法 　　11 材料 　　选取吉林大学第三临床医院手术切除的BPH标本40例，年龄55～73（平均62）岁。Rous分度:Ⅰ度8 例,Ⅱ度12例，Ⅲ度9例，Ⅳ度11例。前列腺癌标本48 例，年龄54～71（平均66) 岁。WHO分级：高分化15例，中分化19例，低分化14例；WhitmoreJewett 分期：A期12例,B期10例，C期16例，D 期10例。另取50例意外死亡者的正常前列腺标本作为对照，年龄36～59 （平均49）岁。 　　12 试剂 　　荧光素标记试剂盒购自华美公司。鼠抗人bFGF 单抗(mAb) 购自Invitrogen 公司。兔抗鼠IgG和ELISA试剂购自福州迈新生物试剂公司。限制性内切酶EcoRⅠ和HindⅡ购自宝生物公司。DAB显色试剂盒购自南京建成生物试剂公司。 　　13 方法 　　131 正常前列腺、BPH 和前列腺癌的斑点杂交 　　①探针制备和标记：bFGF 质粒转化、扩增及提取，参照文献〔4〕方法进行，所得bFGF 质粒经EcoRⅠ和HindⅡ酶切回收探针片段。探针标记采用荧光素标记试剂盒随机引物法。②细胞总RNA 提取：采用异硫氰酸胍一步法。③RNA斑点杂交：以相同浓度总RNA点膜。④检测：采用试剂盒发光自显影法检测，显影胶片应用计算机图像分析技术测定斑点平均吸光度( A) 值。 　　132 正常前列腺、BPH 和前列腺癌的免疫组化染色 　　鼠抗人bFGF mAb 孵育前，用微波炉进行抗原修复10 min，鼠抗人bFGF mAb 的工作浓度1∶100。用PBS 代替鼠抗人bFGF mAb 作为阴性对照，以DAB显色，透明封片。 　　14 判定标准 　　所有阳性染色特征为棕黄色颗粒，位于细胞胞质内。随机观察5～10 个视野，计算100 个腺上皮细胞或癌细胞阳性细胞数，取其均值。阳性细胞数＜10%者(-)，10%～29%者(+)，30%～59%者()，≥60%者()。 　　15 统计学处理 　　应用SPSS100软件包进行统计分析，数据用x±s表示，采用χ2及秩和检验。 　　2 结果 　　21 各组bFGF mRNA表达量比较 　　正常对照组中bFGF mRNA表达量低（23±11）， BPH组（178±29）和前列腺癌组（265±24）中bFGF mRNA表达较高。前列腺癌及BPH组织中mRNA表达水平与正常对照组之间比较差异显著(P＜005) 。 　　22 不同分化程度的BHP组织中bFGF mRNA表达水平比较 　　BHPⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ度组织bFGF mRNA表达水平(pg/μl)分别为197±24（n=8）、186±27（n=12）、169±22（n=9）、188±31（n=11）。经方差分析,4组组间bFGF mRNA的表达无明显差异,提示bFGF mRNA的表达与BPH的分化无明显关系。 　　23 不同分化程度的前列腺癌组织中bFGF mRNA表达水平比较 　　高、中、低分化的前列腺癌组织中bFGF mRNA表达水平(pg/μl)分别为2