酶标、酶仪、洗板机生物技术课.pptVIP

赵文娟 上海交通大学药学院 酶标（ELISA） ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。 以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术 自上世纪70年代初问世以来，发展十分迅速，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。 ELISA技术原理 1. 抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。 2. 结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性。 3. 酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。 4. 受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。 5. 此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。 6. 加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。测定方法具有很高的敏感度（pg-ng/ml水平），并且重复性好。 酶标基本步骤 用于检测未知抗原的双抗体夹心法: 1. 包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。 2. 加样：加一定稀释的待