1光度计点.docVIP

1光度计特点 HYPERLINK javascript:;□采用微机控制并进行数据处理。 □用干涉滤光片作为分光元件，光电管进行光电转换。 □具有钾、钠浓度直读，曲线拟合，灵敏度漂移，自动校正，自动调满度。火焰能量指示，操作失误显示，打印结果等功能。 □线性稳定性、重现性好，尤其适合临床应用。 2技术指标 HYPERLINK javascript:;□分光方式：干涉滤光片 □显示方式：双通道3位数字读数 □量程：k 1mg/L大于100个度数；Na 1.8mg/L大于100个读数 □精密度：CV≤3％ □溶液耗量：6ml/min □阻尼时间：≤6秒 3简介 HYPERLINK javascript:;光度计是每个化学分析实验室必备的常用仪器设备之一，在各种定量和定性分析中得到了广泛的应用。 分光光度计就是利用HYPERLINK /lemma/ShowInnerLink.htm?lemmaId=354045分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器。 而分光光度法则是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析。 常用的波长范围为：(1)200～400nm的紫外光区,(2)400～760nm的可见光区,(3)2.5～25μm（按波数计为4000cm-1～400cm-1）的红外光区。所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计（或HYPERLINK /lemma/ShowInnerLink.htm?lemmaId=8094643比色计）、红外分光光度计或HYPERLINK /lemma/ShowInnerLink.htm?lemmaId=354749原子吸收分光光度计。为保证测量的精密度和准确度，所有仪器应按照国家计量检定规程或本附录规定，定期进行校正检定。 单色光辐射穿过被测物质溶液时，被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度（光路长度）成正比，其关系如下式： A=-log(I/I。)=-lgT=kLc 式中 :A 为吸收度； I。为入射的单色光强度； I 为透射的单色光强度； T 为物质的透射比； k 为吸收系数； L 为被分析物质的光程 c 为物质的浓度 物质对光的选择性吸收波长，以及相应的吸收系数是该物质的物理常数。当已知某纯物质在一定条件下的吸收系数后,可用同样条件将该供试品配成溶液，测定其吸收度,即可由上式计算出供试品中该物质的含量。在可见光区，除某些物质对光有吸收外，很多物质本身并没有吸收,但可在一定条件下加入显色试剂或经过处理使其显色后再测定,故又称比色分析。由于显色时影响呈色深浅的因素较多，且常使用单色光HYPERLINK /lemma/ShowInnerLink.htm?lemmaId=977070纯度较差的仪器，故测定时应用标准品或对照品同时操作。 分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。仪器主要由光源、单色器、样品室、检测器、信号处理器和显示与存储系统组成。 4分光光度计的简单原理 HYPERLINK javascript:;分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。 5核酸的定量 HYPERLINK javascript:;核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。如：1OD 的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算，从而得出相应的样品浓度。测试前，选择正确的程序，输入原液和稀释液的体积，尔后测试空白液和样品液。然而，实验并非一帆风顺。读数不稳定可能是实验者最头痛的问题。灵敏度越高的仪器，表现出的吸光值漂移越大。 事实上，分光光度计的设计原理和工作原理，允许吸光值在一定范围内变化，即仪器有一定的准确度和精确度。如Eppendorf Biophotometer的准确度≤1.0%（1A）。这样多次测试的结果在均值1.0%左右之间变动，都是正常的。另外，还需考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的pH值，离子浓度等：在测试时，离子浓度太高，也会导致读数漂移，因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液，如TE，可大大稳定读数。样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素：由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒，尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在干扰测试效果。为了最大程度减少颗粒对测试结果的影响，