动物细胞培养技术导论.ppt

概述 第一节　体外细胞培养 第二节　动物细胞培养所需的基本条件 第三节　原代培养与传代培养 第四节　细胞系与细胞克隆 第五节　动物细胞的大规模离体培养 第六节　动物细胞的超低温保存技术 主要特点 动物细胞对营养要求高 　　　　——血清来源受限，质量不稳，研发无血清培养液； 动物细胞对培养环境适应性差 　 —— 生长慢，时间长，生长用动物细胞需驯化； 动物细胞培养对环境条件要求严格 ——pH，混合气体（O2、CO2、N2）； 动物细胞培养过程易产生污染 —— 要求苛刻； 各种细胞素长期培养易变异 ——需监测其形态、生长、表达过程； 绝大多数的哺乳类动物细胞具贴壁依赖性生长特征 　　 ——需载体。 培养方法 原代细胞培养 ●依细胞来源，可分 传代细胞培养 液体培养 ●依培养液种类不同，可分 固定培养 　　　　　　　　　　 静止培养、旋转培养、搅拌培养 ●依反应器类型和操 中空纤维培养 作方式不同，可分 固定床或流化床培养 悬浮培养 ●依在反应器生长 贴壁培养 形式不同，可分 贴壁-悬浮培养（假悬浮培养） 培养过程 第一节　体外细胞培养一、体外培养动物细胞类型 二、体外培养细胞的生长与增殖过程 一、体外培养动物细胞类型 　　按照生长方式可分为贴附型和悬浮型两大类。 贴附型细胞 1．定义：是指由它们繁衍出来的细胞只有贴附于不起化学作用的物体表面时，才能生长、生存或维持其功能的细胞。 2．分类 ：(1)成纤维型细胞；(2)上皮型细胞；(3)游走型细胞；(4)多形型细胞 （1）成纤维型细胞： 来源：中胚层的细胞，如成纤维细胞、血管内皮、心肌、平滑肌、成骨细胞等。 主要形态学特征：细胞呈梭形或不规则形，中央有圆形核，胞质向外伸出2-3个长短不同的突起，细胞群常连接成网，生长时呈放射状、旋涡状走向。多数细胞之间排列疏松，有较大细胞间隙。 （2）上皮型细胞： 来源：外胚层和内胚层组织的细胞，如皮肤的表皮细胞、消化道与呼吸道的上皮细胞、肺泡上皮细胞、消化腺上皮细胞、血管内皮细胞等。 主要形态学特征：扁平，形态较为规整，呈多角形，中央有圆形核，生长时常彼此紧密连接成单层细胞片，呈“铺路石状”。 （3）游走型细胞： 来源：具有吞噬作用的单核巨噬细胞系统的细胞（如颗粒性细胞、淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞等）。在植块培养时，这类细胞最先从植块迁移出来。 形态学特征：细胞相互分开；常具有胞质突起或伪足，呈活跃的游走和变形运动，速度快而方向不规则。当细胞密度增大时，游走受限，类似上皮型或成纤维型的细胞。 （4）多形型细胞： 　　是一些形态上不规则的细胞，但不规则形态不是由胞质突起所致，而是一般分胞体和胞突两部分，胞突为细长形，胞体呈多角形，但没有成纤维细胞那样不规则。体外培养中最常见的是神经元和神经胶质细胞。 　悬浮型细胞 1．定义：是不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状态下即可生长的细胞。 2．来源 自血，脾或骨髓，尤以血中白细胞，癌肿细胞也可能 3.特点 　　在悬浮中生长良好 　　细胞圆形，单个或小细胞团。 4．优点：　（1）培养密度可以较大，培养效率高；　（2）传代方便（不需消化）； 　　（3）易于收获； 　　（4）可获得稳定状态。 5．缺点： 　（1）观察不方便； 　　（2）很多细胞不能悬浮生长（尤以正常细胞）。 二、体外培养细胞的生长与增殖过程 　　从总的过程讲，整个生命活动可分为：原（初）代培养期、传（继）代培养期、衰退期。 原代培养期 1.特征： 完成过渡和适应过程，恢复分裂增殖和生长发育能力。 细胞呈现异质性 细胞的结构和功能最接近在体时情况 2. 主要生长生物学行为： 黏附和贴壁：是细胞培养能否成功的第一步 　① 细胞与固相表面亲和性的大小，主要与细胞表面及固相表面所带电荷的性质和量有关。　　② 贴壁与黏附只是程度上的不同 　　　 ③ 不同细胞的黏附能力不同 　　　 ④ 影响细胞黏附和贴壁的因素：　　培养液的温度、培养液中的离子成分及其浓度、培养器皿表面包被的某些生物活性物质 铺展：是进行生命活动的基本的生长特点或生长行为 描述铺展状况的参数： 　　① 培养细胞的面积大小（测微尺） 　　② 培