草鱼出血病检疫技术规范.docVIP

DB43/307-2006DB43/307-2006PAGE ４PAGE ３草鱼出血病检疫技术规范1 范围本标准规定了草鱼出血病(hemorrhage disease of grass carp )的检样要求、检疫方法和无害化处理。本标准适用于我省草鱼出血病的检疫。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。DB43/221-2004 水生动物检疫规程3 术语和定义DB43/221-2004确立的术语和定义适用于本标准。4 检样要求取被检病鱼(5～7)尾，要求材料新鲜无污染，其病症具有代表性。5 检疫方法5.1 群体检疫5.1.1 免疫核实经核实已按规定接种合格的草鱼出血病疫苗，并处在免疫有效期内，可认为免疫符合要求。5.1.2 现场检查仔细检查草鱼有无异常表征，如发现其：尾鳍末端变黑、不食、反应迟钝、独游、易失平衡的；口腔、上下颌、头顶部、眼眶周围、鳃盖及鳍条基部充血、鳃丝呈点状出血；病鱼出血严重时，鳃呈“白鳃”症状；或鱼体暗黑，小的鱼种在阳光或灯光透视下，皮下肌肉充血。草鱼出血的全部或部分症状，可作疑似草鱼出血病对待，并进一步诊断。5.2 流行病学调查 如发现疑似草鱼出血病，应进行草鱼出血病流行病学调查，按附录A的要求执行。5.3 解剖检查 经初步判断为疑似草鱼出血病的患病鱼，抽样进行解剖检查，根据下述病变之一，可初步判断为草鱼出血病：a) 剥开皮肤，肌肉充血和点状出血，呈鲜红色；b) 肠壁充血或出血，全肠或局部呈鲜红色，肠壁弹性较好，肠内无食物，粘液较少；c) 肠系膜、周围脂肪、鳔、胆囊、肝、肾有出血点或血丝；d) 个别情况下，鳔及胆囊呈紫红色；e) 当肌肉出血严重时，肝、脾、肾的颜色变淡。 5.4 病理学检查经初步判断为疑似草鱼出血病的患病草鱼，取其新鲜组织固定、作石蜡切片、H.E染色，用生物显微镜观察，同时，对患病草鱼血液进行显微镜检查。根据下列病理变化，可诊断为草鱼出血病：a) 肠上皮细胞肿胀，杯状细胞有少量增加，肠上皮与固有层剥离，严重时肠上皮完全脱落，固有层和粘膜下层有大量出血，肠腔中有大量红细胞和成片脱落的肠上皮；b) 小血管管壁广泛受损，形成微血栓，脏器组织梗死样病变；c) 在肝细胞等的胞浆内可看到嗜酸性包涵体；d) 红细胞数和白细胞数显著地低于健康鱼；e) 血红蛋白量显著地低于健康鱼；f) 白细胞血式中，淋巴细胞百分率显著地低于健康鱼。5.5 病原电镜检查 草鱼出血病病原为草鱼出血病病毒（Grass Carp Hemorrhage Virus，简称GCHV）。经现场检查、流行病学调查、解剖检查检疫为疑似草鱼出血病鱼的患病草鱼，取其肝、肾、脾、肠、肌肉、血管等组织制作超薄切片，用电子显微镜观察。如在电子显微镜下观察到GCHV病毒，可确诊为草鱼出血病。GCHV病毒特征为20面体和5:3:2对称的球型颗粒，直径为(65～72)nm，具双层衣壳；无囊膜；外周为20个壳粒，核心直径在50nm左右。5.6 免疫学检验 经初步判断为疑似草鱼出血病的患病草鱼，采用下述方法之一可快速确诊。5.6.1 斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)，按附录B的要求执行。5.6.2 葡萄球菌A蛋白协同凝集试验（SPA-COA），按附录C的要求执行。5.7 逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测经初步判断为疑似草鱼出血病的患病草鱼，可进行GCHV病毒逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测，根据琼脂糖核酸电泳观察核酸带，判断是否有GCHV病毒，如检测出GCHV病毒，可诊断为草鱼出血病。其检测步骤按附录Ｄ的要求执行。6 无害化处理6.1 养殖水体用百万分之一的漂白粉溶液全池泼洒消毒。6.2 装运患病草鱼的器具用百万分之十的漂白粉溶液浸泡15min或喷雾消毒。6.3 禁止患病草鱼异地（塘）转移或上市，病死鱼用锅炉焚烧或加盖生石灰后深埋处理。附录A（规范性附录）流行病学调查流行病学调查如表A·1所示。表A·1　流行病学调查调查内容流行病学情况 判 断免疫接种是否接种了草鱼出血病疫苗，免疫程序是否规范。接种了草鱼出血病疫苗，免疫程序规范，初步排除草鱼出血病。流行种类草鱼、青鱼易感GCHV病毒，不表现典型出血症状。只有草鱼、青鱼有典型出血症状，可初步判断为草鱼出血病。如果其他养殖鱼类都出现典型出血症状，草鱼出血病的可能性较小。易感年龄主要是二龄以下草鱼种易患出血病，二龄及二龄以上草鱼基本上不患出血病。只有二龄以下草鱼种，特别是当年和一龄草鱼种出现典型出血症状，可初