北大医学部激光扫描共焦显微镜与流式细胞总结.docVIP

激光扫描共焦显微镜与流式细胞总结 共焦部分 根据激光扫描共聚焦显微镜（Confocal）的工作原理，说明： 为什么Confocal能够逐层采集荧光样品的一系列高清晰光学切片？ Confocal 利用放置在光源后的照明针孔和放置在检测器前的探测针孔实现点照明和点探测，来自光源的光通过照明针孔发射出的光聚焦在样品焦平面的某个点上，该点所发射的荧光成像在探测针孔内，该点以外的任何发射光均被探测针孔阻挡。照明针孔与探测针孔对被照射点或被探测点来说是共轭的，因此被探测点即为共焦点，被探测点所在的平面即为共焦平面。计算机以像点的方式将被探测点显示在计算机屏幕上，为了产生一幅完整的图像，由光路中的扫描系统在样品焦平面上扫描，从而产生一幅完整的共焦图像。只要载物台沿着Z轴上下移动，将样品新的一个层面移动到共焦平面上，样品的新层面又成像在显示器上，随着Z轴的不断移动，就可得到样品不同层面连续的光切图像。 如何实现时间动态程序监测？ 将样品固定在同一个观察视野，利用动态时间程序软件，按照一定的时间间隔，自动采集某时间段内该视野的一系列图像，并定量测定相关参数的随着时间的变化。特点：快速跟踪毫秒级变化。具体操作如下： 在显微镜下找到活细胞； 调节扫描状态，获得满意图像； 把Mode改成XYT； 设定加药时间，加药后观察时间； 开始程序，自动完成程序。