荧光光度法测定二氯荧光素.docVIP

荧光光度法测定二氯荧光素 一、实验目的 1.了解荧光光度法的基本原理。 2.掌握荧光物质的标准曲线法定量测量含量的操作方法和原理。 3.掌握wgy-10荧光分光光度计使用方法，熟悉测量软件的数据处理。 二、方法原理 分子在紫外和可见光的照射下，可吸收辐射形成激发态分子。分子外层的电子在10-8s内返回基态。在返回基态的过程中，部分能量通过热能形式释放，另一部分能量则以辐射光的形式释放。这种分子在光照射下，分子外层电子从第一激发态的最低振动能级跃迁至基态各振动能级时，发射出来的光称为分子荧光，因此荧光是一种光致发光现象。 荧光光谱包括激发谱和发射谱。激发谱和吸收谱极为相似，呈镜象对称关系。 激发谱是荧光物质在不同波长的激发光作用下测得的某一波长处的荧光强度的变化情况，也就是不同波长的激发光的相对效率； 发射谱则是某一固定波长的激发光作用下荧光强度在不同波长处的分布情况，也就是荧光中不同波长的光成分的相对强度。发射谱中最大荧光强度的位置称为(max，是荧光光谱的一个重要参数。 分子发射的荧光强度与浓度的关系遵循比尔定律：I=2.3kbcI0。在一定条件及一定浓度范围内，荧光强度与物质浓度成线性关系。 一般来说，溶液的荧光强度随温度的降低而增强。 如荧光物质为弱酸或弱碱，则溶液pH值的改变常对荧光强度有较大影响。荧光强度一般随介质粘度的升高而增强。因为介质粘度增加，减少了分子碰撞，从而