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荧光定量PCR原理 荧光定量PCR原理 常用名词概念 1，扩增曲线 2，荧光阈值 3，Cq值：达到设定阈值荧光强度时所经过的循环数。 荧光定量PCR原理 荧光定量PCR原理 荧光定量PCR原理 荧光定量PCR原理 荧光定量PCR原理 荧光定量PCR有效性的确认 相关系数（R2）：大于0.98 标准曲线斜率：-3.32 扩增效率：95%-105% Cq值有意义范围：15-35个循环 荧光定量PCR的应用 荧光定量PCR常用标记方法 SYBR Green标记方法 SYBR Green工作原理 SYBR Green标记方法 Taq man探针法原理 Taq man探针法原理 Taq man探针法 相对定量分析 相对定量结果分析 CFX96 的特点 CFX96 的特点： 快速 – 快速升降温 – 即插即用，无需校正， – 软件使用方便，无需设定反应板 简便 – 模块化设计，方便维护 – 软件操作方便 灵活 – 多台仪器连接 – 多种分析模式 快速 CFX96 能快速得到实验结果 安装简便，出厂即经过校正 30 分钟得到很好的实验结果 温度梯度功能，快速优化实验条件 最多可以同时检测5个靶基因，提高检测通量，节约样品 多次实验可以整合在一起，进行数据分析和处理 整合的基因表达分析功能，无需导出数据即能得到基因表达的结果 简便 CFX96 使用简便 长寿命LED光源和一体化检测器，寿命长，性能稳定 10 μl反应体系，即能得到准确的结果 实验结束后，实验结果将作为附件自动发送到电子邮箱，随时随地分析结果 噪音低，使用安静 试剂和耗材开放，无需特别的试剂和消耗品 灵活 CFX96 能满足不同用户的应用需求 软件简单，快速编写程序和分析结果 可以使用“Express Load”功能，快速开始实验,样品信息可以在运行前、运行中或运行后输入 可以按照使用者的需求分析、显示和导出数据，多种分析模式可选，可以显示图形和表格 SYBR Green /FAM快速扫描模式，缩短运行时间 扩展检测通量，一台电脑可以同时运行4台仪器 提供安全版软件，记录仪器运行信息 CFX96 的亮点 高性能PCR仪，出色的温度控制性能 领先的光学检测技术，真正5通道检测 简单易用，功能强大的软件 杰出的温度控制性能 CFX96采用 C1000基座，精确控温 升降温速度快 均一性好 快速设定时间，10 秒钟即能稳定在设定的温度 “蜂巢式”反应模块 专利的“蜂巢式”反应模块确保快速的升降温速度 保持很好的温度均一性，即使在升降温过程中也是如此 温度均一性 运行时间的比较 快速升降温,缩短了运行时间 其他快速PCR 仪器，需要特殊的试剂和耗材，优化的条件，才能实现快速PCR的功能 温度梯度功能 合适的退火温度，对于PCR的特异性和扩增效率非常重要，特别是对于计算实时荧光PCR结果的精确定量 温度梯度功能只要运行一次实验，就能找到最合适的退火温度条件 温度梯度 温差范围 24°C 从后往前逐渐递减（最后排温度最高） 温度梯度范围 30-100°C “动态变温” – 所有的反应孔在同一个时刻到达设定的目标温度，保持相同的孵育时间 先进的光梭移动技术 步进马达控制光梭的移动 先进的控制技术，减少移动部件的磨损，操作更稳定 专利的精确定位技术，误差控制在3um之内， 精确控制光梭的温度，确保均一的激发和检测 多种扫描模式 全通道扫描模式 每个通道，每个样品采集200个数据点 对最后100 数据点进行均一化处理 每个数据点的时间为2毫秒 快速扫描模式（FAM/SYBR Green） 每个样品采集80个数据点 对最后50 数据点进行均一化处理 每个数据点的时间为1.1毫秒 LED LED 的原理 LED是light-emitting diode的缩写，在某些半导体材料的PN结中，注入的少数载流子与多数载流子复合时会把多余的能量以光的形式释放出来，从而把电能直接转换为光能。PN结加反向电压，少数载流子难以注入，故不发光。这种利用注入式电致发光原理制作的二极管叫发光二极管，通称LED。 LED的寿命有多长？ 20,000-30,000 小时 ~5,000 次实验（熔点曲线） ~40,000 次实验（无熔点曲线） 数据采集模式 三种数据采集模式 SYBR/FAM 快速扫描模式，快速得到实验结果 全自动热盖 通过软件或仪器上的按钮自动打开和关闭热盖 弹簧辅助的直流马达控制，类似于汽车的电动车窗 自动感受样品管，防止样品的蒸发，确保结果的均一性 开关20,000次，无需维护 可以使用任意的反应管 新一代软件 按照软件的实验设置指南和多种数据分析工具，快速得到实验结果 和Wi