1苏云金芽孢杆菌类群及致病机理苏云金芽孢杆菌是一种卓有成效的.docVIP

1 苏云金芽孢杆菌类群及致病机理 苏云金芽孢杆菌是一种卓有成效的微生物杀虫剂，在微生物防治害虫的实践中占有极其重要的地位，已被大规模地用于生产，并广泛应用于防治农林害虫、仓库储藏害虫和卫生害虫。 1.1 苏云金芽孢杆菌类群 苏云金芽孢杆菌是一种革兰氏阳性、产生伴晶体、能寄生于昆虫体并引起虫体发病的芽孢杆菌。按其菌体抗体原（H抗原）分类，目前已发现的苏云金杆菌有45个血清型（其中10个含H因子）。我国分离的苏云金杆菌血清型有H1、H2、H5a5b、H5a5c、H6、H7、H8a8c、H9、H10、H14、H18、H20、H22、H40、H42和H43。 苏云金芽孢杆菌类群是包括许多亚种。日本的石渡（Ishiwata）第一次从桑蚕中分离出此类细菌的一个亚种，曾被命名为猝倒芽孢杆菌（Bacillus sotto），随后在1911年德国动物病理学家Barliner从德国苏云金地方的地中海粉螟（Anagasta kuhniella）中又分离出一株致病细菌，1915年首次定名为苏云金芽孢杆菌（Bacillas thuringiensis）。此后世界各国又先后从蜡螟（Galleria）、家蚕、西伯利亚松毛虫（Dendrolimus sibiricus）、印度谷螟（Plodia interpunctella）、一点谷螟（Aphomia galaris）、红铃虫（Pectinophora gossypiella）及其它鳞翅目幼虫中分离出与苏云金芽孢杆菌类似的产晶芽孢杆菌，被陆续命名为苏云金芽孢杆菌的各个亚种。 1. 苏云金芽孢杆菌的培养及其生物性 苏云金芽孢杆菌在蛋白胨—琼脂培养基中，30℃培养24小时，形成针尖大小的黄色小点，边缘光滑，显微镜下观察，深色菌落成毡状放射线；72小时为圆盘状，直径约1cm，菌落淡黄色而湿润，边缘不整齐，成粗布状向外展开，略呈放射状皱纹。 研究表明，苏云金杆菌对营养条件要求不高，能在多种氮源、碳源和无机盐组成的培养基中生长增殖。在生长期间，菌体在葡萄糖和盐类的培养基上生长缓慢，并很少生成芽孢。氨基酸对苏云金杆菌的生长起着重要作用，一般来说，多数菌株只需要一种氨基酸作为外源性氨基酸来完成细胞生长及芽孢、晶体的合成，其中天冬氨酸、谷氨酸以及精氨酸是维持苏云金杆菌生长发育的重要氨基酸，苏氨酸、色氨酸和丙氨酸能使少数菌株微弱生长，而丝氨酸则对菌的生长有抑制作用。 培养基中糖、氮源和磷源的含量比例对苏云金杆菌的生长有显著影响，其中以氮源对菌体细胞数量影响最大，而后依次为糖源和磷源，培养基氮源含量由0.1％增至0.8％，菌数显著增加，但如糖含量增至1.5％，菌数反而下降。发酵周期的长短，主要取决于培养基中含糖和磷酸盐水平的高低，含糖少（0.1％），周期短；含糖多（1.5％），周期长。 2. 苏云金芽孢杆菌类群的分类和鉴定 苏云金芽孢杆菌在1915年首次以 Bacillus thuringiensis Berliner新种出现于文献，其后原始菌种失传，Mattes于1927年重新从地中海粉螟中分离出相同菌种，即为苏云金芽孢杆菌Mattes品系。当时，它的学名及分类地位都是很明确的。但随着苏云金芽孢杆菌的新亚种和新菌株逐渐被分离和发现，而且也由于芽孢杆菌属的种类无论在形态特征以至生化反应上都很近似，因而苏云金芽孢杆菌的学名和分类地位曾出现过较长时间的分歧。1958年，Heimpel和Angus以某些形态学和生化特性为基础研究了7个产生晶体的菌株，并将它们区分为3个亚种。即苏云金芽孢杆菌苏云金亚种（B.thuringiensis subsp. Thuringiensis Berlier）、苏云金芽孢杆菌猝倒亚种（B．thuringiensis sotto Ishiwata）和苏云金芽抱杆菌阿莱亚种（B.thuringiensis subsp. alesti）；以后de Barjac和Bonnefoi（1962）幼对24个产晶体的菌株进行了生化和血清学的研究，将所有这些产晶体的菌株都作为一个类群——苏云金芽孢杆菌类群，并按血清型将各菌株分列为6个血清型的8个亚种，如果某些生化特性不同，还可区分为不同的生物型。至1964年，Norris发现不同亚种的酯酶电泳具有特定的图型，证明用脂酶型来区分晶体细菌与用血清学来区分的结果是一致的，因此认为用酯酶分析可作为辅助的分类标准。随着新亚种的不断出现， de Barjac和Bonnefoi于1973年采用上述标准将分属于12个血清型的17个亚种制成了检索表。从此苏云金芽孢杆菌是一个含有较多亚种的独立种，已为大多数科学家所接受。 鉴别苏云金芽孢杆菌的亚种，可以采用形态、培养特征、生理生化反应、鞭毛抗原血清（H抗