间充质干细胞的传代.pptVIP

实验四 间充质干细胞的培养及鉴定 一、实验目的 1、? 掌握大鼠骨髓间充质干细胞原代培养的方法。 2、? 熟练掌握间充质干细胞的传代、冻存和复苏的操作过程。 3、? 掌握间充质干细胞表面抗原的鉴定方法。 4、通过诱导间充质干细胞成脂、成骨分化，鉴定间充质干细胞的多向分化潜能，并掌握其诱导分化的方法。 二、实验材料、试剂与器材 1 材料：100-150 g SD大鼠。 2 试剂：乙醚，75%酒精，L-DMEM 低糖培养基，胎牛血清，小牛血清，Percoll细胞分离液，1.5M NaCl溶液，0.25%胰酶，FITC标记的羊抗鼠CD29抗体，FITC标记的羊抗鼠CD90抗体，FITC标记的羊抗鼠CD71抗体，PE标记的羊抗鼠CD106抗体，FITC标记的羊抗CD45抗体，β-甘油磷酸钠，地塞米松，维生素C，Hoechst33258，油红O，20 g/ L硝酸钴溶液，20 g/L硫化铵，50%甘油，多聚赖氨酸（PLL）。 3 仪器： 细胞培养箱，微量移液器，倒置相差显微镜，细胞培养皿，荧光显微镜，电子天平，pH计，离心机，超净工作台，电热恒温鼓风干燥箱，电热恒温水槽，超声波清洗机，立式压力蒸汽灭菌器。 三、实验原理 间充质干细胞最早发现于骨髓中，其具有高度增殖和自我更新能力，但骨髓中MSCs的含量很低，约为0.01%。分离间充质干细胞的方法主要有三种：①全骨髓贴壁