Chapter1高效液相色谱法原理选编.pptVIP

沃特世科技（上海）有限公司地址：上海市浦东新区张东路1387号41栋 熊莺 客户培训师 TELMail: ying_xiong@ HPLC 基础 液相原理 目录 历史 色谱法原理 液相色谱系统 HPLC参数与术语 分离度公式 固定相与物理性质 了解范氏方程 色谱柱 色谱的定义 是一种分离科学 在液相或气相中使化合物达到分子水平的分离 Chromato -- 颜色 Graphy -- 图像 首先在俄国科学家Tswett(茨维特)的试验中进行了描述样品－植物提取物 他将植物色素的石油醚提取液倒入装有碳酸钙的直立玻璃管，再加入石油醚使其自由流下，结果色素中各组份互相分离形成各种不同颜色的谱带化合物得以分离 色谱法简介 色谱法（Chromatography）溯源 100多年前俄国植物学家 Tswett（茨维特）分离植物色素时采用的实验方法 Tswett 用希腊语 chroma（色）和graphos（谱）描述他的实验方法，即现在的Chromatography（色谱法） Tswett 的色谱系统 色谱发展史回顾 1903－1906 Tswett首次使用这套色谱系统 1930－1932 Karrer, Kuhn 和Strain用氧化钙、氧化铝和氧化铁做吸附剂 1941 Martin 和Synge引入了柱分离色谱 1944 Gonsden,Gorrdon 和Mardin 介绍了纸分离色谱 1951 Kirchner 引入了我们现在仍在使用的TLC 1952 James 和Martin 发展了气相色谱 1964 L.C.Moor发展了现在仍在使用的凝胶渗透色谱（GPC） 1968 高效液相色谱出现了 色谱法原理 按照分子量区分的色谱类型 HPLC的系统 什么是色谱图？ 色谱图（Chromatogram）： 色谱柱流出物通过检测器时所产生的响应信号对时间的曲线图，其纵坐标为信号强度，横坐标为时间 术语 – 流动相 在HPLC中流动相是液体 所有要分析的样品必须能溶解在流动相中 带着样品与固定相做相对运动 术语 – 固定相 色谱填料－它在色谱柱里处于固定位置 执行化学分离 也被称为色谱填料或吸附剂 固定相与流动相 固定相与流动相具有相反的性质，正是由于这种性质的差别使他们对所分析的化合物具有竞争性 液相色谱图名词术语(1) 色谱图名词术语: 色谱峰(Peak):色谱柱流出组分通过检测器时产生的响应信号 峰底(Peak Base):峰的起点与终点之间连接的直线 峰高(Peak Height):峰最大值到峰底的距离 切线峰宽(Peak Width):在峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点之间的距离 半(高)峰宽(Peak Width at Half Height):通过峰高的中点作平行于峰底的直线,其与峰两侧相交两点之间的距离 液相色谱图名词术语(2) 色谱图名词术语: 峰面积(Peak Area):峰与峰底之间的面积,又称响应值 标准偏差(σ)(Standard Error):0.607倍峰高对应峰宽的一半 拖尾峰(Tailing Peak):后沿较前沿平缓的不对称峰 前伸峰(Leading Peak):前沿较后沿平缓的不对称峰 鬼峰(Ghost Peak):并非由试样所产生的峰,亦称假峰 液相色谱图名词术语(3) 色谱图名词术语: 基线(Baseline):在正常操作条件下,仅由流动相所产生的响应信号 基线飘移(Baseline Drift):基线随时间定向的缓慢变化 基线噪声(N)(Baseline Noise):由各种因素所引起的基线波动 谱带扩展(Band Broadening):由于纵向扩散,传质阻力等因素的影响,使组分在色谱柱内移动过程中谱带宽度增加的现象 色谱参数 V - 保留体积 V0 -死体积 tr - 保留时间 k’ –保留因子或容量因子 ? - 选择或分离因子 N – 塔板数 w - 峰宽 R – 分离度 洗脱体积和峰宽 这些是导出理论和定义所必需的基本测量 容量因子（保留因子，k’ ）：保留能力的量度 k? 是样品与填料作用强度的直接量度 容量因子k’ k’与组分在流动相和固定相之间的平衡有关 k’是一个平衡常数 在正相与反相色谱中的容量因子k’ 容量因子的大小取决于流动相和固定相的极性 可以通过改变流动相中有机相的比例来改变流动相的极性 只适用于吸附和分配色谱 通过改变流动相的极性改变 k’ 分离因子（选择因子，?）：峰分离程度的量度 分离因子（?）的影响因素－流动相 取决于流动相的“化学”性质，即选择不同的有机相 分离因子（?） －固定相 分离度（R）的定义式 R:分离程度的量度 理论塔板数（N）： 柱效的量度 理论塔板数（N）:分离效率的量度 柱效的计