第八章昆虫病原细菌的利用分解.ppt

●（3）使用方法（做到四看） 一看温度。使用Bt的适宜温度在25℃以上，温度过低完全失去杀虫作用。在25~30℃时使用，其防治效果比10~15℃时高出1~2倍。温度低于20℃时最好不使用。 二看湿度。环境湿度越大，其防效发挥越好，因此宜在早晚有露水时喷施粉剂，利于菌剂粘附在茎叶上，并促进芽抱繁殖。较湿润的土壤有助于菌剂的吸附，从而提高杀虫效果。 三看阳光。为了避免阳光中紫外线对Bt细菌芽孢的破坏作用，最好在阴天或晴天下午4时以后使用。如能在Bt中加人粗糖蜜、玉米糖浆或洗衣粉，其防效更佳。 四看雨水。中到大雨会冲刷喷洒在茎叶上的药液，降低防效。如果喷后5h下毛毛细雨有增加防效作用。 思考： 1、Bt的作用机理及使用技术。 2、转基因植物的优点。 3、如何延缓昆虫对Bt的抗性？ 2、培养特征 苏云金杆菌能在多种培养基上生长，在不同的培养基上形成的茵落形态有所不同。 苏云金杆菌的不同变种在相同的固体培养基上，培养性状基本上颇为近似，但也表现有一定程度的差异。 3、生理特性 Bt.对营养条件要求不高。 碳源：淀粉、糊精、麦芽糖、葡萄糖等。氮源：牛肉膏、蛋白胨、酵母粉、花生饼粉、豆饼粉、鱼粉，玉米浆等。无机盐：磷酸氢二钾、硫酸镁、碳酸钙等。 Bt.在12-40℃间的温度条件下都能生长，以27-32℃较为适宜，35-40℃生长很快，但易衰老，温度低则生长缓慢。 该菌适于微碱性条件，最适pH是7.5，当pH达8.5时还能正常形成芽孢，如pH降至5以下则不能形成芽孢。 4、苏云金芽孢杆菌的类群 根据营养细胞鞭毛抗原的血清学反应及其它特性，苏云金芽孢杆菌可划分为71个血清型和88个血清型亚种。 到目前为止，已发现苏云金芽胞杆菌的伴孢晶体蛋白至少对脊椎动物中4个门和节肢动物门中9个目的有害生物有活性。 少数苏云金杆菌产生外毒素（exotoxin）血清，对家蝇亦有毒性。 5、苏云金杆菌不同亚种或菌株对昆虫的致病性和毒力的差异 苏云金杆菌的不同亚种对昆虫的毒力差异很大。 即使是同一个亚种，不同菌株对昆虫的毒力差异也可以很大。毒力的大小与产生的毒素有关，也与细菌的致病机制和寄主昆虫的特异性有关。 （二）苏云金杆菌的毒素和致病机理 1、苏云金杆菌的毒素 苏云金杆菌能产生对多种昆虫或其他无脊椎动物有害的活性成分，这些活性成分是其杀虫的核心。目前，已从Bt中发现了10几种有不同功能的生物活性成分。 （1）杀虫晶体蛋白（Insecticidal crystal protein，ICP） 伴孢晶体（Parasporal crystal）、伴孢晶体包含体（Parasporal crystal inclusion body）、晶体蛋白（Crystal protein）、晶体毒素（Crystal toxin），又称δ-内毒素，是苏云金杆菌具有杀虫性能的主要毒素。 ICP由cry基因和cyt基因编码，这些基因大多位于染色体外的质粒上。ICP的分子量27-140kDa,形状各异。Bt的杀虫活性与ICP的形状、结构、大小密切相关。 ① ICP基因的命名 1981年Schnepf从HD-1中克隆到了第1个ICP基因。 1998年Crickmore依据ICP基因的核苷酸序列及其演化关系，将ICP基因分为4级。 2009年8月，ICP基因按照核苷酸序列的同源性已被分为cry1-cry59, cyt1和cyt2共61类，487个，其中cry基因460个，cyt基因27个。 ②ICP的三维结构及功能 ICP中最先获得三维结构的是鞘翅目昆虫特异性毒素蛋白Cry3A，接着又获得鳞翅目昆虫特异性毒素蛋白Cry1Aa的三维结构。 结构域Ⅰ：由8个α螺旋组成，与细胞膜插入及孔隙形成有关； 结构域Ⅱ：由3个β折叠片和2个短的α螺旋组成，与昆虫上皮细胞表面毒素受体的结合有关； 结构域Ⅲ：由2个β折叠片形成一个面对面的β夹层结构，具有毒素的稳定性、特异性与结合有关。 （2）营养期杀虫蛋白（Vegetative insecticidal protein，VIP） 是专指营养期表达的杀虫蛋白。 具有热不稳定性的可溶蛋白，95℃处理20min便失去活性。 2009年8月，有65个vip基因被鉴定分离。VIP由vip1、vip2、vip3三种基因编码，杀虫活性各不相同，且在氨基酸序列的进化上与ICP没有任何同源性。 Vip3A以可溶性蛋白的形式存在于害虫中肠，与中肠上皮细胞上的受体结合，形成稳定的离子通道，破坏中肠形成孔洞，造成昆虫死亡。对夜蛾科害虫具有广谱的杀虫活性。 一些对Bt杀虫晶体蛋白有很强抗性的昆虫对Vip3A都较为敏感，如