酶工程制药分解.pptVIP

* * 优点：结合牢固，稳定性好，可重复使 用，是目前研究最为活跃的方法。 缺点：反应剧烈，酶活性易受影响。 * * 2、交联法 酶分子的交联基团：－NH2、－OH、－SH等。 常用交联剂：戊二醛 用双功能和多功能试剂，使酶与交联试剂之间形成共价键的固定化方法。 类似于共价结合法，区别在于载体不同。 制备较困难，活性损失较大。 * * 3、包埋法 载体与酶溶液混合后，通过物理作用将酶限定在载体的网格中。 常用载体： 明胶、琼脂、琼脂糖、聚丙烯酰胺、海藻酸钠等。 优点：条件温和，酶活力回收较高。 缺点：酶易泄漏，扩散受限。 * * 网格型 将酶或者细胞包埋于高分子凝胶细微网格中。 微囊型 将酶或者细胞包埋于高分子半透膜中。 * * 酶的固定化方法 * * 固定化细胞的制备 细胞固定化技术，也称为第二代固定化酶。 为了减少从微生物细胞中分离提纯酶的麻烦，直接利用微生物细胞内的复合酶系统，所以将细胞固定化。 * * 二、固定化酶的性质和指标 酶固定化后结构发生变化， 活力下降。 带来扩散限制效应、空间障碍、载体的分配效应等 * * 1.固定化后酶活力的改变 大多数情况下，固定化后酶活力下降。 固定化胰蛋白酶对底物酪蛋白只显示原活力的30%，而对底物苯酞精氨酸-对硝基酰替苯胺的活力保持80%。 一般认为高分子底物受空间位阻的影响比低分子底物大。 * * 酶活力改变的原因 空间构象发生变化，酶的活性中心的重要氨基酸与载体发生了结合。 空间位阻，即酶活性中心与底物接近受阻。 包埋时，酶被高分子半透膜包围，大分子不能透过。 * * 2.酶的稳定性变化 指对温度、pH、蛋白酶变性剂和抑制剂的耐受程度，固定化酶稳定性一般都升高。 （1）热稳定性 耐热性提高，最适温度提高，反应能在较高温度下进行 （2）对有机试剂及酶抑制剂的稳定性提高 具体表现在： （3）对pH、蛋白酶、储存和操作条件的稳定性提高 * * 3.固定化酶的最适温度变化 由于固定化后，酶的热稳定性提高，所以最适温度也随之提高。 * * 4.固定化酶的最适pH发生变化 酶固定化后，对底物作用的最适pH和酶活力- pH曲线常发生偏移。 发生偏移的原因是微环境表面电荷性质的影响。 * * 5.固定化酶的米氏常数变化 主要是由于高级结构的变化及载体的影响引起酶与底物亲和力变化 * * 酶反应器（enzyme reactor）： 用于各种酶进行催化反应的容器及其附属设备。 生物反应器 发酵罐 * * 反应器的种类 1. 搅拌罐反应器 （batch stirred tank reactor,BSTR) 特点：底物与酶一次性投入反应器，反应完成后产物一次性取出。 优点：装置较简单．造价较低，传质阻力很小。 缺点：固定化酶经反复回收使用时．易失去活 性．故在工业生产中，很少用于固定化酶，主要用于游离酶反应。 * * 2.连续流动搅拌罐反应器 （continuous stirred tank reactor,CSTR） 向反应器投入固定化酶和底物溶液。不断搅拌，反应达平衡之后，再以恒定的流速连续流入底物溶液．同时以相同流速输出反应液（含产物）。 缺点： 搅拌桨产生的剪切力较大，容易引起固定化酶的破坏。 * * 3.填充床反应器 （pack bed reactor,PBR) 将固定化酶填充于反应器内，制成稳 定的柱床，然后，通入底物溶液，以 一定的流速收集输出的转化液（含产物)。 工业生产中常采用上向方式，可以避免下向流动的液压对柱床的影响 目前应用最普遍，发表的文章也最多。 当底物溶液含固体颗粒或黏度很大时，不宜采用PBR，因为固体颗粒易堵塞柱床。 * * 4.流化床反应器（pack bed reactor,PBR） 底物溶液以足够大的流速，从反应器底部向上通过固定化酶柱床，使固定化酶颗粒始终处于流化状态。 适于处理粘性强和含有固体颗粒的底物。 * * 5.循环反应器（recycle reactor,RCR) 进料口与出料口以管道相连，反应过程中部分输出液与新加入的底物液混合，再进入反应床进行循环。 转化率较高。 * * 酶反应器多种多样，不同的反应器有不同特点。那么，应该怎么选择酶反应器呢？ * * （一）根据酶的应用形式选择反应器 1.游离酶反应器的选择 搅拌罐式反应器、膜反应器、鼓泡式反应器、喷射式反应器等混合效果较好，较为适合游离酶的催化反应。 * * 游离酶催化反应最常用的反应器是搅拌罐式反应器。 对于以气体作为反应底物的酶催化反应，通常采用鼓泡式反应器。 对于某些反应产物的相对分子质量较小、较难获得、价格较高的酶，可采用游离酶膜反应器，以利于酶的回收利用。 对于某些耐高温的酶可以选用喷射式反应器。 *