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免疫组化显色系统 Visualization Systems of Immunohistochemistry(IHC) 免疫组化技术原理 用标记物或显色物标记抗体或抗原 通过免疫学中的抗原与已知抗体反应来检测组织或细胞内的抗原成分 免疫组化染色是一项综合性技术 组织材料的准备 免疫组化染色前处理 免疫组化染色(一抗, 显色系统) 免疫组化原理图标注解 回顾过去 目前常用的显色系统 一步法: EPOS ( Enhanced Polymer One-Step Staining) 二步法: EnVision Systems 双染: General Doublestain 三步法: LSAB (Labeled Sstreptavidin-biotin) 催化放大系统:CSA (Catalyzed Signal Amplication System) 动物研究试剂盒: ARK (Animal Research Kit) 一步法EPOS 原理: 在一抗上通过多聚骨架标记过氧化物酶.即一抗上已标记过氧化物酶. 这种一抗与抗原结合后即可直接显色. 一步法EPOS 主要实验流程 一步法EPOS 特点: 一抗孵育后直接显色 即用型试剂 快速(一步)完成 敏感性较差 昂贵 使用对象: 要求快速出结果的免疫组化实验对象 二步法EnVision 原理: 在葡聚糖大分子上标记二抗及酶, 将传统的二抗和三抗(酶)连接在一起,形成一个复合物EnVision. 两步孵育完成免疫组化. 二步法EnVision 原理图 二步法EnVision 主要实验流程 二步法EnVision 特点: 二抗及酶通过葡聚糖连成一个大分子试剂(避开了传统的生物素与链亲和素结合), 不受内源性生物素干扰. 即用,方便,快速(两步). 敏感性强. 背景低. 是目前最理想的免疫组化显色系统 使用对象 可向所有做免疫组化的用户推荐. EnVision二步法双染 原理: 与EnVision二步法原理相同, 只是为达到在同一组织上标记两种抗原. 必需用两种动物来源的一抗(常用抗小鼠和兔),分别配相应的EnVision(二抗) , 再用两种颜色的显色剂显色. EnVision二步法双染 原理图 EnVision二步法双染 主要实验流程 EnVision二步法双染 特点: 即用,方便,快速,省时. 敏感性强. 背景低. 在同一组织切片上, 用两种不同标记物标记两种不同的抗原. 使用对象 需在同一张切片上标记两种抗原者 主要是形态学科研人员 三步法 LSAB  (Labeled Streptavidin-biotin) 原理: 应用生物素标记二抗与过氧化物酶或碱性磷酸酶标记链亲和素(Streptavidin)的亲和作用, 连接一抗及抗原, 形成大分子.再通过相应酶的底物(显色剂)作用使之显色. 三步法 LSAB  (Labeled Streptavidin-biotin) 原理图: 三步法 LSAB  (Labeled Streptavidin-biotin) 主要实验流程 三步法 LSAB  (Labeled Streptavidin-biotin) 特点: 便宜 有现成的兔, 鼠, 羊通用试剂盒 会有内源性生物素造成的非特异性背景 使用对象 可向所有做免疫组化的用户推荐. 催化放大系统CSA (Catalyzed Signal Amplication System) 原理 在经典三步法免疫组化放大基础上,通过生物素化酪胺的催化,将又一次加入的酶标记链亲和素(Streptavidin-enzyme)与二抗中生物素亲和,使已放大的分子再一次放大. 催化放大系统CSA (Catalyzed Signal Amplication System) 原理图 催化放大系统CSA (Catalyzed Signal Amplication System) 主要实验流程: 催化放大系统CSA (Catalyzed Signal Amplication System) 特点: 敏感性极强 实验步骤较多 较贵 使用对象: 需做免疫组化实验者, 特别适用于某些石蜡片不易出结果的一抗. 动物研究试剂盒 ARK (Animal Research Kit) 原理 在一抗与组织抗原反应之前: 小鼠一抗F(c)与生物素化抗小鼠F(ab)片断结合,再加入小鼠免疫球蛋白, 中和未被结合的生物素化抗小鼠F(ab). 用该复合物再与小鼠组织中特异抗原反应, 可降低非特异性背景. 动物研究试剂盒 ARK